结核豚鼠模型（含耐药株）

3.1实验用豚鼠的选择：

选择体重:300~350g SPF级，雌性Hartley豚鼠（提供厂商：北京维通利华实验动物技术有限公司）。动物使用申请号:中国医学科学院实验动物研究所实验动物管理委员会（批准号：MC—09-2003）。

3.2饲养环境

—动物生物安全3级实验室（ABSL-3）；温湿度范围：18-28℃；相对湿度：40-70％；换气次数：机械送排风；明暗周期：12h/12h；照度：150-300Lux；清洁消毒：用具、笼架等在投入使用前进行消毒；笼具种类及饲育密度：豚鼠笼，3只一笼；

3.3饲养条件

饲料:中国医学科学院实验动物研究所华阜康有限公司豚鼠专用饲料,自由采食；垫料为中国医学科学院实验动物研究所华阜康有限公司，定期更换；饮水；普通自来水经过高压(121℃,30min)，自由饮用。

3.4观察

豚鼠在进入ABSL-3实验室之后，进行检疫，PPD阴性者，观察4~5天后，进行感染实验.

3.5实验用豚鼠的分组及感染：

实验共分为四个大组，第一组为正常对照组(生理盐水)、第二组为高剂量组（1X104CFU）、第三组为中剂量组（1X103CFU）和第四组低剂量组（1X102CFU）。每组36只均，共144只（5只备用，实际为150只），均采用后肢蹊部皮下注射。

3.6感染用菌株

结核分枝杆菌标准菌株Dt株（ATCC 35810）和结核菌耐药株（内部编号94789）

3.7实验观察

感染后，每天观察感染豚鼠的临床症状，每周称取豚鼠体重，观察不同感染剂量豚鼠体重和脏器指数的变化规律。

3.8解剖后病理和荷菌量检测

分别在感染后1d、2d、3d、5周和6周，每组解剖6只豚鼠，分别无菌活体心脏取血，并在解剖后1/2脾脏、1/2肺脏和1个腹股沟淋巴结，无菌研磨后接种L-J斜面进行结核分枝杆菌的分离培养。并将同一组织的剩余部分固定在10%福尔马林中，进行病理切片。

4.1. 感染后动物的临床症状观察

豚鼠表现为被毛凌乱不规则，饮食欲差等，以高剂量组表现较为明显。小鼠感染结核菌后主要是在毛发凌乱不规则，活动少，精神状态、食欲差，以尾静脉感染组小鼠比较重。

4.2. 感染后动物体重的变化结果

4.2.1感染后的豚鼠脏器指数

变化主要表现在脾脏和肺脏，豚鼠在体重下降的同时脾脏在感染后一周内脏器指数没有明显的变换，但在一周之后脾脏体重指数不断升高，最高达到了0.03%。肺脏体重指数是在感染后3天就开始升高，第7天时达到一个峰值，最高达到1%，7天后缓慢下降。变化曲线见图1、2：

图1 豚鼠感染结核分枝杆菌后脾脏体重指数变化曲线

图2 豚鼠感染结核分枝杆菌后肺脏体重指数变化曲线

4.3感染后动物病理变化

4.3.1 豚鼠感染后解剖眼观病理变化

豚鼠在感染5周时，解剖发现在脾脏、肝脏、肺脏及大网膜上有不同程度突出于脏器表面、粟米大小、灰白色半透明的结核病灶，且脾脏肿大。结果见图3：

图3豚鼠感染结核分枝杆菌后解剖眼观病理变化

A:脾脏；B:肺脏；C:肝脏

4.3.2豚鼠的组织病理病变

正常对照组的肺脏和脾脏未见明显病理改变。104CFU、103CFU、102CFU组内均有不同程度 肺组织内血管旁淋巴细胞浸润，肺组织内肉芽肿，肝脏也有肉芽肿和坏死灶，病变主要集中在脾脏，脾脏肉芽肿、坏死灶和多核细胞。结果见图3：

图3 豚鼠病理切片HE染色结果

A:正常肺脏；B:正常脾脏；C:肺组织内血管旁淋巴细胞浸润C: 脾脏组织内肉芽肿；EF:肝组织内肉芽肿及坏死灶

4.4豚鼠组织荷菌量

感染两周后，104CFU、103CFU、102CFU组的肺、脾、淋巴结中均可培养出结核菌。其中104CFU组在感染1天后上述组织即可培养出结核菌，而103CFU、102CFU组则在感染后7天培养出结核菌。感染5周后脾组织荷菌量见下图4：

图4 豚鼠感染结核菌5周后脾组织荷菌量

横坐标所示：A：102CFU,103CFU，104CFU组；纵坐标所指：log10CFU值。