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猪既能感染人流感病毒,又能被禽流感感染,是因为猪上皮细胞表面同时存在着人和禽流感病毒的受体,而所有亚型流感病毒HA都识别唾液乳糖丝氨酸酶。禽流感倾向于结合SAα2,3半乳糖相联的结构,而人流感病毒倾向于与SAα2,6半乳糖相联的结构结合。SA分布于所有的流感病毒宿主体内,猪的气管中同时存在着SAα2,3半乳糖和SAα2,6半乳糖受体。猪通常被认为是流感病毒的混合器,自然界流行的流感病毒经过猪感染或传代后,出现病毒重组产生新的病毒。
制作流感病毒感染动物模型应用SPF小型猪,4月龄。
病毒株为A/California/07/2009(H1N1),实验猪经过麻醉后待肌肉彻底放松,将其放置仰卧位,用喉镜撑开会厌,通过气管插管将病毒,感染剂量为107TCID50病毒液滴入上呼吸道。感染后观察临床症状,监测存活率及体重变化率。感染后5d处死,收集肺组织,进行肺组织载量检测和病理学检查。
感染病毒后,实验猪感染后未见明显临床症状,无死亡,存活率如图1所示。
图1 感染后猪存活率(n=3)
实验猪在感染后第5d处死取肺组织,通过RT-PCR,可以检测到肺组织有病毒RNA复制,如图2所示。
图2 感染后猪肺组织载量(n=2)
实验猪在感染后第5d处死取肺组织,免疫组织化学(IHC)检测发现病毒抗原分布在猪肺组织上。HE染色结果证实感染后猪肺组织即呈现出典型的流感病毒感染的病理表现,包括炎性充血和渗出性病理改变等等,并逐渐发展为间质性肺炎,如图2所示。
图2 感染后猪肺组织切片HE染色和免疫组化分析。G: 正常猪肺组织切片HE染色对照; G’: 感染后猪局部肺组织织切片HE染色; G’’: 感染后猪局部肺组织免疫组化。
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