SHIVKU1静脉途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:39

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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标识符	CSTR:16397.09.0G16000432
资源中文名称	SHIV KU-1静脉途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV KU-1
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIV KU-1中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为103.75TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：用0.4ml SHIV KU-1病毒原液经后肢静脉接种恒河猴。 4、SHIV KU-1静脉感染猴样品采集和指标测定：感染前和感染后按指定时间点采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、SHIV KU-1静脉感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SHIV KU-1静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数
模型表型数据	1、临床症状 G1301V在长期感染过程中，健康状况良好，无典型感染症状。G1302V在感染前期状态良好，但自感染350d后精神逐渐萎靡，长期慢性腹泻，于感染后457d死亡。 2、SHIV KU-1静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果两只实验猴（G1301V和G1302V）都在感染后第4d就检出了血浆病毒载量，其后一直在1.0×104 copies/mL左右波动，没有出现明显的载量高峰（图1）。图1 SHIV KU-1静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1 3、SHIV KU-1静脉感染恒河猴CD4+/CD8+比值结果感染后外周血中CD4+/CD8+都有一个明显下降过程（图2）。G1301V在感染后的3w内从感染前的1.96下降到0.50，短暂徘徊后持续上扬，至3个月，已基本恢复至初始水平，达到1.53；G1302V感染前1.21，感染后3w降至0.1，其后稳定在0.2左右，至感染后400d下降接近0。图2 SHIV KU-1静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1 4、SHIV KU-1静脉感染恒河猴CD4+细胞绝对数结果两只猴G1301V和G1302V在CD4+T细胞绝对数上变化基本相同（图3）。感染后外周血CD4+T细胞数迅速下降，3w后分别从感染前990个/mL、1300个/mL下降到最低点420个/mL和76个/mL，其后基本保持水平，3个月时为590个/mL和180个/mL。G1302V在感染后期一直维持在100个/mL以下。图3 SHIV KU-1静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1
动物模型的评价与验证	充分模拟静脉注射吸毒人群的感染方式，通过静脉途径，病毒直接感染血液中的靶细胞，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究

我们的承诺

　　北检检测技术研究院承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。