基于HIV融合抑制剂的艾滋病潜伏感染恒河猴模型

1、实验材料：SHIVSF162P3病毒；选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。

2、静脉途径SHIV恒河猴感染模型制作方法：

先用宠物用电推剪推去猴上肢采血部位的猴毛，左手抓住一侧后肢跗关节部位，使后肢皮下静脉怒张。用75%酒精酒精棉球消毒。右手拿吸取病毒液的注射器，针头沿静脉平行方向向向心端刺入血管，见回血后，左手放松，不再紧压，右手缓慢将病毒液推入。完毕后用干棉球压迫止血，将注射器拔出，弃在利器专用桶内。

3、给药方法：将建立稳定的SHIVSF162P3慢性感染的恒河猴，经肌肉注射3mg/kg的HIV融合抑制剂，每周给药一次，连续给药6个月。

4、样本收集和检测：定期收集外周血样本，提取病毒RNA和病毒DNA，测定血浆病毒载量和总病毒DNA

1、血浆病毒载量变化情况：

我们检测了LP-19、LP-50/LP-51和LP-80等HIV融合抑制剂在恒河猴感染模型的治疗情况。如图1所示，基于M-T钩子设计的短肽LP-19抑制剂可以将猴子体内SHIV病毒载量降到不可检测水平，而停药后在10天左右出现病毒反弹[1]。

图1 LP-19在恒河猴SHIV感染模型的治疗效果

与LP-19相比，LP-50和LP-51抑制剂的抗病毒活性得到极大的提高，达到极低的皮克摩尔（pM）水平。在恒河猴SHIV慢性感染模型，LP-51低剂量治疗可以迅速将病毒载量降到检测线以下，停药后两周左右出现病毒反弹[2]。值得关注的是，J0猴子经过反复的三次治疗仍然有效（图2）。

图2 LP-51在恒河猴SHIV感染模型的治疗效果

我们通过对LP-51进行结构优化获得LP-80，其在细胞水平上的抑制活性高于T-20和广谱中和抗体VRC01大于5300倍，在猴体内的活性高于T-20超过10000倍。在大鼠和恒河猴的药代动力学研究表明，LP-80在体内可以达到极高的药效浓度，且半衰期较长，适于每周1-2次给药治疗。如图3所示，LP-80对SHIV慢性感染猴子反复两次的治疗都表现出很好的治疗效果[3]。第一次治疗时，猴子采取每天给药联合每4天给药的方式，发现一周两次治疗可以很好地控制猴子的血浆病毒载量至检测线以下。待停药后病毒反弹稳定，我们继续给予一周两次、持续6个月的第二次治疗。

图3 LP-80在恒河猴SHIV感染模型的病毒RNA结果

2、病毒DNA变化情况：

LP-80不仅控制了血浆病毒RNA至检测线以下，而且有效地降低了病毒DNA的拷贝数，图4显示了LP-80治疗下病毒DNA的变化情况。

图4 LP-80在恒河猴SHIV感染模型的病毒DNA结果

3、 血生化检测

动物模型建立的整个实验过程中，全部实验猴分别在第一次治疗和第二次治疗前后检测血生化，未见明显差异。而且，在动物安乐后，各组织脏器未见明显异常。