SHIVKB9静脉途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:43

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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400-062-0567

标识符	CSTR:16397.09.0G16000433
资源中文名称	SHIV-KB9静脉途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV-KB9
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIV-KB9中国恒河猴细胞适应株，RT-PCR测定病毒拷贝数为4.8×108copies/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：4只恒河猴编号分别为A0423、A0424、A0425和A0426。病毒原液依次用无血清1640培养液做10倍系列稀释。经后肢静脉感染，每只猴注射1mL稀释好的病毒液。A0423-A0426分别注射10-1-10-4病毒液1mL。持续测定8个月。 4、SHIV-KB9静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、35、42、49、56、70及84天采集猴静脉血6mL，3mL EDTA抗凝，用于病毒载量和CD4+/CD8+值测定。 5、SHIV-KB9静脉感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SHIV-KB9静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。
模型表型数据	1、临床症状感染SHIV-KB9病毒后，A0425在感染后第120天出现食欲不振、水样腹泻、掉毛和体重减轻，到感染后第130天发展至严重水样腹泻，至18周后，愈发虚弱，直至感染后149天濒临死亡，动物安乐处死，并按计划取材留样。其余感染猴未出现皮疹、体重下降、食欲不振、机会性感染等典型的艾滋病症状。 2、SHIV-KB9静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果在血浆病毒载量方面，A423和A424在感染后第7天首次出现阳性，之后载量上升，A423于感染后第14天达到它的最高峰（9.62×107 copies/mL），之后缓慢下降，但在我们的观察期（161天）内，一直维持在103 copies水平之上。A424在感染后第10天达到一个高峰（5.333×105 copies/mL），之后在103-106之间波动，到感染后第56天达到它的另外一个高峰（6.082×106 copies/mL），后在我们的观察期内未检测到病毒载量。A0425病毒载量在28天7.22×105copies/mL，35天达到高峰3.51×108 copies/mL，随后下降，至10w降到了104 copies/mL，之后出现反弹，达到4.11×106 copies/mL，并长期维持在这个水平上直至发病。A426动物在整个实验期间，未检测到血浆病毒载量阳性（图1）。图1 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB9 3、SHIV-KB9静脉感染恒河猴CD4+/CD8+比值结果四只实验猴CD4+/CD8+比例结果显示，实验前，其比值均大于1。接种病毒后，A423-A425在感染后前5周有个下降－回升－再下降的过程，其中A423于感染后21天降至最低值0.15，之后缓慢回升，在161天之前都在0.5之下徘徊，之后进入波动期，在0.26-0.78之间波动，但总体趋势是上升的，并于感染后357天回升至1.08。A424在前五周有几个幅度较大的波动，并于感染后35天达到最低点0.48，之后缓慢回升，从第35天的0.48一直波动回升到第329天的1.67。A425的初始CD4+/CD8+比值是四只猴中最高的，它在感染后第35天CD4+/CD8+比值达到最低点0.0125，之后缓慢回升，但一直维持在0.2以下，直至安乐处死。 A426的CD4+/CD8+比值在前三个月一直未见异常变化，到感染后91天出现下降，之后回升，维持于1附近（图2）。图2 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-originalrhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB9 4、SHIV-KB9静脉感染恒河猴CD4+细胞绝对数结果病毒感染前，A4023-A0426四只猴的CD4+ T细胞绝对数都在1000个/μL以上。SHIV-KB9感染后，四只猴在感染后前三周都有个上升－下降－再上升－再下降的过程，（图3）。A0423在感染后21天到达最低点每μL血液中244个CD4+细胞，之后缓慢上升，到感染后203天超过1000个/μL。A0424在感染后28天到达最低点每μL血液中418个CD4+细胞，之后波动上升，到感染7周之后超过1000个/μL。A0425对SHIV-KB9的反应最强烈，在感染后3天它的CD4+ T细胞绝对数从最初的1073个/μL，迅速升到4270个/μL，到第10天更是升至5254个/μL，之后迅速下降，到感染后35天降为16个/μL，并维持这个水平一直到安乐。A0426也是在感染后28天到达最低点每μL血液中465个CD4+细胞，之后波动上升，到感染11周之后超过1000个/μL。图3 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB
动物模型的评价与验证	通过静脉途径，病毒直接感染血液中的靶细胞，制备静脉途径艾滋病恒河猴感染模型，用于艾滋病研究。
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合作方式	合作研究

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