SHIV1157ipd3N4静脉途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:46

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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标识符	CSTR:16397.09.0G16000437
资源中文名称	SHIV-1157ipd3N4静脉途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV-1157ipd3N4
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIV-1157ipd3N4，中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×102TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：10只恒河猴随机分为6个剂量组，由10-1至10-6，分别经后肢静脉感染稀释好的病毒液1mL。G1005V、G1006V、G1007V（10-1 ，50TCID50），G1008V、G1009V 、G1010V（10-2，5TCID50），G1011V、G1012V、G1013V（10-3，0.5TCID50），G1014V（10-4，0.05TCID50）。 4、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、70及84d采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数和血浆结合抗体水平。 5、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴血浆病毒载量的测定：TRIzol法提取血浆中病毒RNA，Quantitect SYBR Green RT-PCR Kit测定血浆病毒RNA载量。 6、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。 7、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度检测：恒河猴血浆样品灭活后系列稀释，用“人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）”检测交叉性体液免疫反应，高于Cut-off值的最大血浆稀释度定义为SHIV特异性总结合抗体滴度
模型表型数据	1、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果 50 TCID50感染猴中G1005V和G1007V均在感染后7d就检出血浆病毒载量，G1006V也在14d阳转。5 TCID50感染猴G1008V、G1009V、G1010V的血浆病毒载量则均出现在感染后14d。6只感染猴高峰期的载量都在105 -107copies/mL之间，42d后载量水平均有所下降，但随后反弹（图1）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间未出现血浆病毒载量。图1 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 2、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 50 TCID50感染猴G1005V、G1006V、G1007V在感染后21d均有下降，随后反弹。5 TCID50感染猴中除G1010V外， G1008V和G1010V也在21d下降并反弹。G1009V则不降反升，但它在56d有一次大幅下降，但也仍然在1以上（图2）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间基本保持恒定。图2 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 3、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果各剂量组之间在CD4+T细胞绝对数上变化基本相同。感染猴中除了50 TCID50感染猴G1007V和5 TCID50感染猴G1008V在实验后期有升高外，其它4只在整个实验期间基本保持水平（图3）。未感染的4只实验猴则整体呈现逐渐上升的趋势。图3 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 4、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度测定 50 TCID50感染猴G1005V和G1007V的抗体在感染后21d就出现了，另一只感染猴G1006V也在28d阳转。与此同时，5 TCID50感染猴中只有G1009V在21d抗体阳性，其它两只感染猴G1008V和G1010V抗体阳转时间为42d。42d以后，6只感染猴之间的抗体水平逐渐接近了（图4）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间未检出抗体。图4 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血总结合抗体滴度 Fig.4 The titers of Ab in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4
动物模型的评价与验证	通过静脉途径，病毒直接感染血液中的靶细胞，制备静脉途径艾滋病恒河猴感染模型，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究

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