SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:47

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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标识符	CSTR:16397.09.0G16000438
资源中文名称	SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIVSF162P3
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位，后肢抬高，暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、SHIVSF162p3阴道感染猴样品采集和指标测定：感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3，间隔4-7d，进行阴道感染。在每次感染前及13次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL，分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、SHIVSF162p3阴道感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SHIVSF162p3阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。
模型表型数据	1、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血病毒载量结果 6只实验猴都先后出现了血浆病毒载量（图1）。1-1感染后27d出现载量，37d达到高峰（6.498×107copies/mL），57d载量检测阴性消失，但在85d载量再次出现，直至246d载量一直都维持在105copies/mL左右。1-2病毒载量出现最早，初次感染后的23d达到5.665×105copies/mL，27d达到高峰（2.1×107copies/mL），随后下降，至57d检测呈阴性，共持续了4周时间，并且一直到第246d都持续阴性。1-3和1-4的载量变化与2号相似，只是载量出现时间稍晚，1-3的载量出现在37d,高峰期在45d,也达到了107copies/mL的水平，但只维持了2周的时间；1-4比1-2晚4d出现载量，出现时载量也已达到105copies/mL的水平，高峰期出现在31d（4.72×106copies/mL），维持了3周左右的载量。不同的是，它们分别在感染后154d和203d出现一过性小幅反弹，载量水平只在103-104copies/mL之间。1-5和1-6的载量出现最晚，均出现在感染后50d,并且不连续，没有明显的高峰，始终维持在104-106copies/mL的水平。图1 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 6只实验猴的CD4+/CD8+比值在某一段时间内均有一个急剧下降的过程，总体有一个下降的趋势。1-1在感染后37dCD4+/CD8+比值迅速从感染后31d的1.51下降到0.50，并且持续走低，到300d时，已降低到0.35。1-2和1-4总体没有太大的变化，但分别在感染后31d和37d有一个下降过程。1-2由27d的3.89直降到1.55，其后又迅速回升，始终徘徊在3.0附近；1-4由2.72直降到1.69，并维持在这个水平上，只在182d有一个小幅波动。1-3和1-5变化基本相同，分别在感染后45d和64d降到最低，并且出现倒置，其中1-5甚至降到0.5以下，其后反弹并一直维持在0.8-1.0之间。1-6与1-3、1-5趋势相同，变化幅度小，没有出现倒置，始终维持在1.0以上，最低值1.02出现在85d（图2）。图2 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果所有实验猴的CD4+细胞绝对数在感染50天内都基本保持稳定，在1000个/µL全血上下浮动，随后均有逐步下降，但下降幅度不大，最低值始终在600以上（具体数据未显示）。只有1-1下降幅度较大，到感染后274d时，已降到293个细胞/µL猴血（图3）。图3 SHIVSF162p3阴道途径感染恒河猴1-1 外周血CD4+T细胞绝对数的变化 Fig.3 The CD4+ T cell counts in Chinese-original rhesus macaques 1-1 infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3
动物模型的评价与验证	用导尿管将病毒缓慢注入猴阴道内，建立异性性传播动物模型，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究

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