SHIVSF162P3静脉途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:49

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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400-062-0567

标识符	CSTR:16397.09.0G16000440
资源中文名称	SHIVSF162P3静脉途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravenously infected with SHIVSF162P3
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×103TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：10只恒河猴随机分为6个剂量组，由10-1至10-6，分别经后肢静脉感染稀释好的病毒液1mL。G0802V（10-1，500TCID50）、G0803V、G0804V（10-2，50TCID50），G0805V、G0806V（10-3，5TCID50），G0807V、G0808V（10-4，0.5TCID50），G0809V、G0810V（10-5，0.05TCID50），G0811V（10-6，0.005TCID50）。 4、SHIVSF162p3静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、70及84d采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、SHIVSF162p3静脉感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SHIVSF162p3静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。
模型表型数据	1、SHIVSF162p3静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果 10-1感染猴G0802V和10-2感染猴G0803V在感染后7d血浆就检出104 -105copies/mL的病毒载量，另一只10-2感染猴G0804V和10-3感染猴G0805V、G0806V也在14d转阳。5只感染猴的病毒载量高峰峰值均在106 -107copies/mL之间。感染后28d-42d载量下降，但G0802V一直维持阳性直到感染后88d。10-2感染猴G0804V在下降后转阴，G0803V在103 -104copies/mL之间浮动。10-3感染猴G0805V与G0804V情况一致，G0806V则在42d反弹，载量维持在103 -104copies/mL之间（图1）。其它实验猴在整个观察期间未见载量阳转。图1 SHIVSF162p3静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3静脉感染恒河猴CD4+/CD8+比值结果 5只感染猴在感染后均有CD4+/CD8+比值的下降（图2）。除10-2感染猴G0804V外，其它4只感染猴下降幅度均较大。但下降后10-3感染猴G0805V、G0806V很快回升到原来的水平，而10-1感染猴G0802V 和10-2感染猴G0803V 在很长时间内在1以下徘徊，直到感染后88d才升到1以上。图2 SHIVSF162p3静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3静脉感染恒河猴CD4+细胞绝对数结果 5只感染猴外周血中CD4+T淋巴细胞的变化不是很明显，基本在一个水平上下浮动，没有明显的升高和降低（图3）。图3 SHIVSF162p3静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIVSF162p3
动物模型的评价与验证	通过静脉途径，病毒直接感染血液中的靶细胞，制备静脉途径艾滋病恒河猴感染模型，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究

我们的承诺

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