H5N1禽流感病毒气溶胶吸入感染雪貂模型

雪貂呼吸道解剖结构上下呼吸道分腔明显，受体分布与人极为接近，是迄今为止最为敏感的流感病毒感染动物模型。它对人流感病毒高度易感，病毒不经适应即能使雪貂致病，并易传播给雪貂和人。在自然条件下，雪貂一般也是通过呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的发病过程和机体反应也与人体相似。雪貂除对人流感病毒高度易感外，对禽流感、猪流感病毒也十分敏感，且感染后出现典型症状。

病毒株为A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011和A/Vietnam/1194/2004禽流感病毒，经血凝抑制（HI）实验，筛选出6月龄以下对当下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亚型流感病毒相应血清抗体均为阴性的去势雪貂。为了使动物适应并降低应激反应，所有雪貂均在感染前一周进行体温芯片的皮下植入和实验室适应（使用扫描仪监测体温，BMDS, USA）。感染组通过肌肉注射盐酸塞拉嗪对雪貂进行麻醉，轻度麻醉后感染组每只雪貂经鼻接种病毒。传播实验是在笼子中进行的，该笼子旨在防止动物之间的直接接触，但允许已接种的雪貂与相邻的幼稚雪貂之间保持气流。两组三只雪貂经鼻内接种104TCID50病毒400uL；一组接种了A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒，另一组接种了A/Vietnam/1194/2004病毒。在感染后第24小时，将每只接种过的动物和幼稚的雪貂分别饲养在传播笼中，以测试病毒的传播能力。观察所有动物的临床体征，每天称重作为疾病的指标。分别在感染后第1、3、5、7和9天或暴露后从已接种和未接种过的动物收集鼻拭子和咽拭子，并转移至1 ml PBS中。通过在MDCK细胞中的终点滴定确定病毒滴度。

两组三只雪貂经鼻内接种104TCID50病毒：一组接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒，另一组接种A/Vietnam /1194/2004病毒。观察动物的临床体征，并每天称重以。两种病毒均使雪貂出现打喷嚏、耸毛、嗜睡和食欲下降。一只接种了A/Vietnam/1194/2004病毒的雪貂在接种病毒4天后死亡； A/wild bird/Hong Kong/ 07035-1/2011病毒感染的雪貂无死亡情况。攻毒后9天内，接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒的动物体重下降峰值为10.3％，而接种A/Vietnam/1194/2004病毒的动物体重下降峰值为27.8％（表1，图1）。

表1A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011感染雪貂的临床症状和排毒情况

图1感染雪貂体重

2.雪貂排毒情况

对于这两种病毒，从上呼吸道排出的病毒始于感染后第1天，一直持续到感染后第7天。使用鼻拭子检测到的上呼吸道排毒水平，接种A/Vietnam/1194/2004病毒的动物拭子中病毒滴度明显高于接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011的动物毒（P<0.01）（图2）。

两种病毒都没有通过呼吸道飞沫从接种的雪貂传播到幼稚的雪貂。机载接触组的雪貂的鼻拭子或咽拭子中均未检测到病毒（图2））

图2雪貂感染H5N1禽流感后鼻/咽拭子中病毒滴度

3.传播组雪貂血清中H5N1抗体水平

根据HI分析，接触雪貂的恢复期血清（暴露后21天）对病毒特异性抗体阴性（表2）。

表2传播组雪貂血清中H5N1抗体水平