基于ESC/HR的基因编辑

基于胚胎干细胞技术基因编辑流程

基于胚胎干细胞的基因编辑是利用干细胞的全能性进行基因编辑小鼠制备。首先将打靶载体电转进小鼠胚胎干细胞。筛选成功重组的细胞克隆，注射到正常小鼠囊胚中。注射后，干细胞在囊胚中扩增分化，形成嵌合胚胎。然后将囊胚移植到代孕小鼠中。最终，将嵌合小鼠与野生小鼠品系进行繁育，获得含有可遗传目的基因的模式动物。

敲除小鼠模型

在基于ESC技术的基因敲除小鼠中，我们使用正筛选标记来替换目的基因的外显子，目的基因被全身性敲除，而在条件基因敲除动物中，该基因仅在选定的细胞中被敲除，这由组织特异性启动子决定。通常使用Cre-LoxP或Flp-Frt重组酶系统制备条件基因敲除小鼠模型。

敲入小鼠模型

将目的DNA片段插入基因组中的特定位置来制备基因敲入小鼠。利用这种方式也可以制备包括点突变，报告基因敲入，标签敲入，Cre工具鼠和人源化小鼠等。