MicroRNA实时定量PCR检测

客户提供

（1）新鲜的足量材料（细胞数10⁷以上，组织100mg以上），或者提供保证质量的RNA样品（5μg以上）；

（2）提供检测的miRNA信息。

服务内容

（1）RNA抽提；

（2）qRT-PCR检测客户所需的miRNA分子；

（3）递交详细的实验报告；

组织或RNA样品采集，保存与运输

一、哺乳动物培养细胞

收集并用冰冷的PBS洗涤细胞，将细胞沉淀（1×10 ⁷个细胞）中加入1 ml的RISO ^TM裂解液。反复吸打几次后，细胞层溶解完全。- 70 ^oC保存或干冰运输。注：RISO ^TM处理的标本冷藏（4 ^oC）运输，短期（5天以内）亦可。

二、动物血液、组织样品采集、保存与运输

1、血液样本

客户需预先用淋巴细胞分离液分离新鲜血液中单个核细胞，然后采用培养细胞同样的处理方法保存及运输。

2、新鲜组织样品

取新鲜组织（注：处死后5min内取材，或新鲜组织离体时间不超过5min），组织块以冰冷的PBS或生理盐水清洗干净，并切为小块。

A、使用Biomics的RISO ^TM试剂

每50～100 mg组织加1 ml RISO ^TM溶液匀浆裂解组织样品，于冰上进行。匀浆的裂解液4 ^oC短期保存（1个月），-20 ^oC或-70 ^oC长期保存。干冰运输，短期（5天以内）冷藏（4 ^oC）运输亦可。

B、使用RNAlater试剂

将组织放入装有5倍体积RNAlater的冻存管中，4 ^oC孵育过夜，然后转入-20 ^oC中保存。RNAlater处理的标本可用常规冰袋4 ^oC低温运输（无需使用干冰-70 ^oC运输）。

3、冻存组织的保存与运输

A、立刻放入干冰或液氮中冷冻2-3小时后可转入-70 ^oC冰箱保存或保存在液氮中。

B、运输方法：冻存组织可放入干冰中直接运输，或者以RISO ^TM 4 ^oC下匀浆；冻存的组织块以液氮研磨后加RISO ^TM或直接加RISO ^TM以电动匀浆器匀浆，匀浆的裂解液干冰运输或短期（5天以内）冷藏（4 ^oC）运输。