土拨鼠肝炎病毒感染模型

2023-12-21 16:04:32

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摘要：人乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染引起的传染病，全球至少有20亿人曾经被乙肝病毒感染。HBV是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，据目前所知，HBV只对人和猩猩有易感性。HBV在肝内繁殖复制，但是对肝细胞无明显的直接损伤作用，但会引发免疫系统攻击感染HBV的肝细胞，形成慢性肝炎，继而发展为肝纤维化，是引发肝癌的重要因素。

目前，由于HBV疫苗的使用，使HBV感染率显著降低，但慢性乙肝存在较大的转为肝癌的风险。由于缺乏理想的乙肝动物模型，限制了针对乙
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标识符	CSTR:16397.09.0F01001048
资源中文名称	土拨鼠肝炎病毒感染模型
资源英文名称
疾病概述	人乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染引起的传染病，全球至少有20亿人曾经被乙肝病毒感染。HBV是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，据目前所知，HBV只对人和猩猩有易感性。HBV在肝内繁殖复制，但是对肝细胞无明显的直接损伤作用，但会引发免疫系统攻击感染HBV的肝细胞，形成慢性肝炎，继而发展为肝纤维化，是引发肝癌的重要因素。目前，由于HBV疫苗的使用，使HBV感染率显著降低，但慢性乙肝存在较大的转为肝癌的风险。由于缺乏理想的乙肝动物模型，限制了针对乙肝病程发展和干预治疗策略的研究进展。 1978年，萨默斯(Summers)等发现费城动物园的土拨鼠感染土拨鼠肝炎病毒（Woodchuck Hepatitis Virus，WHV）。WHV与HBV在形态学、基因结构、基因产物、复制过程、流行病学及疾病和肝癌的发展上有很高的相似性，WHV可引起急性自限性感染和慢性感染，其发病机理及免疫反应机制和HBV类似。WHV感染成年土拨鼠会导致急性自限性肝炎，而感染新生土拨鼠会发展为慢性肝炎，慢性肝炎易发展为肝细胞癌（HCC），土拨鼠模型的疾病发展特征使其成为研究慢性乙型肝炎向终末期肝病转化的理想动物模型。
实验动物背景信息	东方土拨鼠
模型制作方法	1、病毒制备 WHV为cWHV7P1毒株（NCBI存储号:M18752.1），来自美国乔治敦大学微生物与免疫室，采集来自慢性感染土拨鼠的血清，病毒储存液浓度为1×1010拷贝/ml。 2、动物 7日龄-1月龄土拨鼠。实验前进行血清病毒WHV DNA的PCR检查，阴性土拨鼠方可入组。 3、感染实验动物经兽用氯胺酮麻醉后，经颈外静脉注射WHV，感染剂量分别为5×106 WID50（低剂量）和1×107 WID50（高剂量），感染体积为100 μl，病毒储存液用生理盐水稀释，对照组土拨鼠注射等体积的生理盐水，感染后的土拨鼠隔离饲养。在感染后不同时间点，动物经兽用氯胺酮麻醉后，心脏取血，离心分离血清。 4、血清检测感染后血清标志物检测：土拨鼠肝炎病毒表面抗原（WHsAg）和核心抗原（WHcAg）经过大肠杆菌原核表达系统表达，经镍离子亲和层析纯化。WHsAg分别免疫兔和鸡后获得兔抗WHsAg抗体和鸡抗WHsAg抗体。通过ELISA双抗夹心法检测WHsAg，ELISA直接法检测WHcAb。 5、核酸检测使用DNA提取试剂盒QIAamp MinElute Virus SpinKit从50 μl血清中抽提 WHV DNA。利用实时荧光定量PCR测定血清中WHV DNA拷贝数，引物为WHVSF1WHVSR1(5’-GGCAACAACATAAAAGTCAC-3’5’-AACTAAACCACGTGGTATGTC-3’)，梯度稀释的WHV DNA质粒做标准品。 6、肝功能检测取血样检测感染后土拨鼠肝功能酶：丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)。 7、病理诊断甲醛固定的土拨鼠肝脏组织经石蜡包埋，常规病理组织切片处理后，HE染色，显微镜下观察病理改变。 8、免疫组化肝脏病变组织经过组织修块，石蜡包埋后，切片厚度为4μm，经脱蜡水化，抗原修复，滴加20%正常山羊抗血清室温封闭后，滴加兔抗WHsAg抗体，稀释比例1:500,4度过夜。次日PBS洗涤，滴加荧光标记二抗，稀释比例1:5 000，PBS洗涤后，DAB显色，脱水封片，镜下观察。我们的承诺　　北检检测技术研究院承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。相关文章中析实验室上一篇：关节炎模型下一篇：结核树鼩模型服务领域动物模型生物学检测动物实验联系方式热线电话: 400-062-0567 投诉举报：010-82491398 邮箱地址：010@yjsyi.com 京ICP备15067471号-9 联系我们济南分部山东省济南市历城区唐冶绿地汇中心36号楼北京分所北京市丰台区航丰路8号院1号楼1层121 聊城分所山东省聊城市高唐最新发布花粉活力发芽率检测保质期（加速）试验种子发芽率检测驱虫检测驱蚊试验驱蚊实验空气中细菌检测动物冷冻保种服务动物净化服务实验外包服务福建分所热门项目高尿酸血症鹌鹑肠道菌群结构分析过敏性哮喘诱导模型高蛋白高钙饮食合并限制饮水建立鹌鹑痛风模型鹌鹑动脉粥样硬化模型实验外包服务痴呆症模型小鼠关节炎模型 STZ诱导糖尿病ICR小鼠模型人大细胞肺癌H460红色荧光标记肿瘤模型大鼠脊髓损伤模型友情链接：

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