过敏性紫癜兔模型

1．实验动物

1.5月龄日本大耳白兔24只，12只雌雄各半为模型组，12只雌雄各半为对照组，体重1.2～1.4kg，普通级动物房饲养。

2.模型构建

1）过敏体质的构建

中医热性药物干姜、荜茇、胡椒水煎剂以1:1:1的比例混合成15%的水溶液，4℃保存备用。动物适应1周后，模型组口服给药，1次/日，连续3周，对照组给以等量生理盐水，其它条件相同。

2）抗原致敏

腹腔注射卵白蛋白生理盐水与弗氏完全佐剂以1:1比例混合的乳化溶液1mL，1次/周，连续3周。对照组腹腔注射等量的生理盐水。

3）抗原激发过敏反应

腹腔注射致敏3周后，动物耳缘静脉和皮内分别注射1%和0.3%卵白蛋白生理盐水，激发过敏反应。之后观察动物皮肤红肿状况，照相存档。

1.模型的皮肤特征

　　兔耳缘静脉及皮内注射卵白蛋白生理盐水溶液后，皮肤注射部位均会出现直径1cm左右的皮丘，6h后模型组兔的背部皮丘逐渐变大，且周围水肿，皮内血液渗出；至18h左右，呈现片状紫斑，直径2-10mm，形状不规则，大小不等，还有一些斑点出现在耳朵和腿部（图1）。在激发第8天左右，皮肤紫癜开始变小，渗出减少，20天左右，症状明显改善。皮肤症状出现的比例约为85%。

注：a、对照组兔的背部皮肤b、模型组兔的背部皮肤

图1 激发后兔的外部特征观察

2.模型病理特征

（1）脏器组织形态学改变

　　模型动物病理表现为皮下出血，真皮水肿，血管扩张充血、出血，炎细胞浸润；肾小球囊腔蛋白渗出物，血管扩张充血及局灶性慢性肾炎，肾小球系膜基质增多，系膜增厚，红细胞管型，炎细胞浸润等；还可见到关节腔滑膜淤血，结缔组织坏死，炎细胞浸润等；胃黏膜可见出血，坏死脱落；小肠绒毛血管扩张充血，上皮细胞脱落；肺淤血，肥大细胞似有脱颗粒现象；肝灶性炎细胞浸润等等（图2）。

注：a.真皮水肿，炎细胞浸润；b.真皮血管充血，出血；c.皮肤正常对照；d.肾小球囊腔蛋白渗出物，炎细胞浸润；e.肾小球系膜增厚，血管扩张；f.肾正常对照；g. 关节滑膜淤血，结缔组织坏死，炎细胞浸润；h.胃黏膜水肿，上皮细胞脱落；i.肺淤血，伴肥大细胞脱颗粒。

图2 过敏性紫癜兔模型的组织病理改变

（2）皮肤、肾脏免疫复合物沉积

　　免疫荧光检测发现IgA免疫复合物在模型组兔皮肤主要沉积在皮肤真皮层血管壁、肾小球系膜区，血管壁及肾小球入球小动脉壁，常呈斑点状、团块状、分支状或短线状分布（图3）。

注：a.模型组兔皮肤组织，b. 对照；e.模型组兔肾脏组织，f 对照。

图3 皮肤和肾脏的免疫荧光检测

（3）肾小球纤维增生性改变

　　肾脏Masson染色结果显示模型组动物（a）肾小球系膜纤维化增生，胶原纤维蛋白增多，使得系膜增厚，基质增多，与（c）图PAS染色结果模型组兔肾小球系膜增生，系膜基质增厚相一致（图4,5）。

注：图a, b分别为模型组和对照组兔的肾脏Masson染色；c,d分别为模型组和对照组兔的肾脏PAS染色。

图4 兔肾脏Masson和PAS染色

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组

图5 兔肾脏masson和PAS染色单个肾小球内胶原蛋白及糖原面积的百分比

（4）皮肤和肺脏的嗜酸性细胞浸润

　　嗜酸性粒细胞的皮肤（图a,b）和肺脏（图c,d）Luna染色，表现为单位面积（1mm2 ×40倍）视野内模型组兔皮肤真皮层和肺间质内嗜酸性粒细胞明显增多（图6,7）。

图a（模型组），b（对照组）为皮肤Luna染色；图c（模型组），d（对照组）为肺组织Luna染色

图6 兔皮肤和肺组织的Luna染色

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组

图7 兔皮肤和肺组织的Luna染色单位面积嗜酸性粒细胞含量

（三）血尿常规及便潜血改变

　　血白细胞WBC升高，RBC相对于减少，PLT数量激发后无差异性改变，NEU、NEU%均升高，EOS、EOS%升高（图8）。尿液变稠表面观察有拉丝现象，气味大，67%尿蛋白阳性，尿红细胞阳性；实验前便潜血检测阴性，激发实验后70%便潜血阳性。

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组.

图8 过敏性紫癜兔模型血常规改变

　　长春中医药大学4～12岁，住院 2～5天的12名患者血常规检测白细胞（WBC），粒细胞（Gran），单核细胞（MONO）及百分比MONO% 明显增加，分别超出正常范围的百分比为33.3%(4/12)，25%(3/12)，41.6% (5/12)，33.3% (4/12)。淋巴细胞百分比（LYMPH%）明显减少，低于正常参考范围的比例为25% (3/12)，血小板未见明显异常改变（表1）。

表1 患者血常规检测

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组.

（四）模型血免疫指标改变

　　HSP兔血清IgA升高，IgG降低，C3，C4减少，IgE无明显改变（图9）。外周血CD3+T细胞数目减少，CD4+T细胞减少，CD8+T细胞增多，CD8+T细胞所占百分比升高，CD4+T细胞百分比下降，IL-2水平下降，TNF-α水平升高（图10）。

　　长春中医药大学4～12岁，住院 2～5天的12名患者血清IgA， IgE升高（p<0.01），IgG升高（p<0.05），C3，C4减少（p<0.05）。血CD4+T细胞百分比下降，CD4/CD8比值下降，IL-4、TNF-α水平升高，差别均具有统计学差异。（图11,12）

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组.

图9 HSP兔模型血清免疫球蛋白和补体改变 图11 HSP患者血清免疫球蛋白和补体改变

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组.

图10 HSP兔模型血免疫细胞及细胞因子的改变

﹡P<0.01，﹡﹡P<0.05，相对于对照组.

图11 HSP患者血免疫细胞及细胞因子的改变