引物合成

　　单链DNA (寡核苷酸)短片段的引物在生物技术领域如PCR 扩增、DNA 测序等实验中，具有非常重要的作用。北检院生物技术服务中心采用国际先进的DNA 合成仪，能为客户精确合成各种类型的引物。为了保证引物的质量和通量，本平台配备了多台先进的DNA合成仪，可以高质高效地为客户精确合成各种类型的引物;并提供RPC、PAGE、HPLC等多种纯化方式，所有产品经严格的质量抽检后才发货。对引物进行荧光标记是分子生物学常用的研究手段，本平台可以为客户提供5' 或3' FAM、5' HEX等30多种引物荧光标记服务。

　　合成能力：长度可达110 base。

　　纯化方式：RPC纯化、PAGE纯化、HPLC纯化。

　　合成报告：随产品提供OD值、nmol数、分子量、Tm值等数据报告。

　　引物纯化：

　　C18柱脱盐

　　又称为简易反相柱，对DNA有特异性吸附，可被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，因此能有效地去除盐分，但不能有效去除比目的片段短的小片段。该方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。

　　RPC纯化

　　RPC纯化是通过反相净化滤芯 (Reverse Phase Cartridge) 对引物进行纯化，纯化原理与反相HPLC纯化一样。与反相HPLC比较，RPC是一种有效并且更加经济的纯化方式。反相净化滤芯通常包含一种疏水基质如 C18的硅胶，能够很好的吸附DNA，并且可以用水轻松地将切割下来的保护基团和短的引物片段从反相柱上洗掉。RPC纯化的引物可以应用于DNA测序、 PCR及基因合成等。

　　PAGE纯化

　　PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物DNA进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的DNA纯度大于90%，对长链Oligo DNA (大于50 mer)的纯化特别有效。

　　HPLC纯化

　　HPLC纯化是使用高效液相色谱的原理，对引物DNA进行纯化。该方法用于分离纯化或分析时能达到很高的纯度和灵敏度。在引物DNA的分析和纯化中，常用的有离子交换(ion-exchange)HPLC和反相(reverse-phase)HPLC。reverse phase HPLC：纯度大于90%;ion exchange HPLC：纯度大于95%，可以有效的去除N-1短片段。HPLC纯化主要用于短链和修饰引物的纯化。该法的缺点是成本较高，批量生产效率不高。

　　修饰引物：

　　基团修饰：硫代修饰，稀有碱基(dI、dU)，修饰基团(氨基、生物素、地高辛、巯基、磷酸化)。

　　荧光标记：FAM、TAMRA、FITC、TET、HEX、Cy3、Cy5等标记。

　　双标记荧光探针：探针5' 端标记荧光基团，3' 端标记淬灭基团，采用组合纯化方式，保证了探针的质量。

　　分子信标：呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，一端标记荧光基团，另一端标记淬灭基团，自由状态下两个基团靠近，荧光淬灭;与靶序列结合，分子信标构型改变，恢复荧光。