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(1)取成牛眼球,75%酒精消毒,取出周围多余组织,用PBS洗3次,用PBS流水冲洗眼球3次。
(2)沿角膜缘剪开眼球,弃掉角膜、晶体、玻璃体等部分,将眼球后半部翻转取出视网膜,将其剪碎平皿内加入适量0.25%的胰酶,在37℃培养箱中,采用分次消化,每次消化20min约8次。
(3)每次消化后取上清液,并加入等量的含10%的DMEM培养基,轻轻混匀,中和胰酶的消化,防止消化过度。用200目细胞过滤筛子过滤含细胞的混合液,最后将过滤后的细胞悬液1000rpm离心5min。离心后收集沉淀,用PBS再次重复离心3次。用细胞培养基将细胞沉淀重悬,接种于细胞培养瓶中培养,并每日观察细胞的生长,接种后约4d后有少量细胞贴壁。
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