大鼠脂肪间充质干细胞原代培养

 实验步骤：

1. 取大鼠，使用7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉，在无菌条件下迅速取出脂肪组织。

 2. 用含1%青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次，剥离脂肪组织上的血管。
 3. 将脂肪组织剪碎，直到组织变为液体状，加入8-10mL 胰酶，37℃消化90min。
 4. 消化完成后，加入等量含血清DMEM 培养基终止消化，过200目筛网去除大块组织。
 5. 以1500r/min 离心5min，去上清液，加入含血清DMEM 培养基重悬细胞。

 6. 接种至6孔板，放入细胞培养箱（37℃，CO2 浓度5％），细胞稳定培养24h后换液，冲去未贴壁的细胞，更换DMEM培养基（成分同上）继续培养，以后每2天换液1次，注意观察培养基有无浑浊、颜色变淡、漂浮物和絮状物等。

细胞形态：

大鼠脂肪间充质干细胞培养过程中，约24h即可贴壁生长，细胞呈长梭形生长速度较慢。换液后细胞增殖明显，出现以长梭形为主的形态，5- 7d  70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一，呈长梭形。