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实验步骤:
1. 取大鼠,使用7%水合氯醛(0.5ml/100g)麻醉,在无菌条件下迅速取出脂肪组织。
2. 用含1%青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次,剥离脂肪组织上的血管。 3. 将脂肪组织剪碎,直到组织变为液体状,加入8-10mL 胰酶,37℃消化90min。 4. 消化完成后,加入等量含血清DMEM 培养基终止消化,过200目筛网去除大块组织。 5. 以1500r/min 离心5min,去上清液,加入含血清DMEM 培养基重悬细胞。
6. 接种至6孔板,放入细胞培养箱(37℃,CO2 浓度5%),细胞稳定培养24h后换液,冲去未贴壁的细胞,更换DMEM培养基(成分同上)继续培养,以后每2天换液1次,注意观察培养基有无浑浊、颜色变淡、漂浮物和絮状物等。
细胞形态:
大鼠脂肪间充质干细胞培养过程中,约24h即可贴壁生长,细胞呈长梭形生长速度较慢。换液后细胞增殖明显,出现以长梭形为主的形态,5- 7d 70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一,呈长梭形。
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