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方法:
1、新生1天内的SD大鼠,断头,剪开头皮及颅骨,取出脑组织,置于盛冷的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。
2、无菌剥离脑组织,分离大脑皮层,仔细剥离脑膜及血管。
3、将组织剪切成 1mm3左右的组织块,0.125%胰蛋白酶消化,37℃作用 15-20min,制成细胞悬液。
4、悬液收集于新的离心管,弃上清液重悬,过滤。台盼蓝计数。接种到预先用多聚赖氨酸包被的24孔培养板。
5、培养 4~6h,全量更换为2%B27 Neurbasal培养液。体外培养第3d,加入Ara-C-工作液,以抑制非神经细胞过度增殖,作用 24 h后吸出。此后每 3d半量换液1次 , 体外培养第 7~21天的细胞用于实验。
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