轻症EV71动物模型

　　采用EV71临床分离株（NX10-36）病毒建立轻症小鼠模型，用104.5 TCID50/ml的病毒滴度经腹腔注射感染9日龄BALB/c乳鼠，6 dpi轻症小鼠发生竖毛的临床表现；对轻症EV71小鼠模型连续观察14天，绘制生存率（图1A），体重增长曲线（图1B），临床评分（图1C）。所有小鼠存活到14 dpi，并且其体重增长与空白对照组小鼠无差异（p >0.05）。

轻症小鼠模型各组织病毒载量检测

　　为了进一步探讨轻症EV71小鼠模型体内病毒载量情况，采用RT-PCR对3 dpi和5 dpi轻症小鼠脑、脊髓、骨骼肌、空肠和肺组织进行病毒核酸检测（图1D），发现以上各组织在3 dpi和5 dpi 均检测到EV71病毒，其中，检测到轻症模型3 dpi骨骼肌中的高病毒载量（106.0 copies/mg），5 dpi病毒载量未见明显增加，其中，3 dpi 在轻症模型脑组织中均检测到低病毒载量(102.0copies/mg)，5 dpi脑组织中病毒载量均增加到104.0copies/mg。3 dpi在轻症模型脊髓、空肠和肺组织中的病毒载量在103.0到104.0copies/mg，5 dpi 病毒载量无明显变化。轻症小鼠模型中均检测到骨骼肌和脊髓中较高的病毒载量，说明这些组织是病毒复制并传播到脑组织的重要部位。

图1.EV71毒株（NX10-36）104.5TCID50经腹腔注射感染乳鼠建立轻症小鼠模型的生存率、体重、临床评分和组织内病毒载量

A. 生存率; B. 体重;C. 临床评分; D. 各组织内的病毒载量

轻症小鼠模型组织病理学变化

　　运用组织病理学和免疫组织化学技术，对轻症小鼠模型的各组织器官进行病理学观察。空白对照组小鼠未见明显病理变化，并且EV71抗原呈阴性反应。

　　对轻症小鼠模型（NX10-36）组织病理学观察（图2），发现5dpi 小鼠后肢骨骼肌发生肌炎，多量炎性细胞浸润，主要有淋巴细胞、巨噬细胞、少量嗜中性粒细胞，而3 dpi肌纤维之间见炎性细胞浸润，肌细胞未发生坏死；3 dpi和5 dpi脊髓前角和脑干可见少量神经元发生变性，可见血管源性水肿，在5 dpi脊髓神经元尼氏小体消失（图2-23C）；3 dpi在肺脏和空肠中未见明显病理学变化，5 dpi肺脏发生局灶性间质性肺炎，间质增宽，炎性细胞浸润，肺泡间隔毛细血管淤血；5 dpi 空肠发生大面积黏膜上皮细胞空泡变性。免疫组织化学检测结果发现在上述病变的组织中可观察到EV71特异性抗原分布（图3），在3 dpi和5 dpi脊髓、脑干和骨骼肌检测到较强的阳性EV71抗原信号，而在肺和空肠组织中检测到中等强度阳性EV71抗原信号。

图 2.轻症小鼠模型各组织的组织病理学检测

图注：9日龄BALB/c乳鼠腹腔注射104.5TCID50EV71毒株（NX10-36），3 dpi和5 dpi解剖取材，图片显示各组别的典型组织照片（×200），箭头指示5 dpi各组织典型病理变化，对照组小鼠组织未见明显病理变化。

图3.免疫组织化学方法检测轻症小鼠模型各组织中的EV71 VP2蛋白

图注：轻症小鼠的骨骼肌、脊髓、脑干、肺以及空肠组织中可检测到阳性EV71抗原（棕黄色颗粒）（×200），在空白对照组的上述组织中未见阳性EV71抗原。