H9N2接触传播途径感染BALB/c小鼠模型

小鼠是用于评估流感感染最常用的哺乳动物模型。小鼠的品种和品系很多，是实验室动物中培育品系最多的动物，其遗传学背景也研究的比较详尽。优点是价格相对低廉，遗传谱系清晰，品系纯正，供给充足；当然也有着多方面的缺点，主要表现在：首先小鼠不是流感的天然宿主还缺少人流感病毒的临床症状；多数毒株感染后表现为体温过低而非发热；不能传播病毒。

实验用小鼠在其呼吸道上通常表达SAα2,3Gal和SAα2,6Gal两种唾液酸受体，因此对人流感病毒、禽流感病毒都较为易感。但人A型流感病毒（H1、H2、H3）一般要经过在小鼠上适应性传代才能有效复制，而一些低致病性和高致病性禽流感如H5N1、H2、H6和H7病毒则不需要适应传代即可感染。特别是对于H5和H7等高致病性禽流感病毒感染不仅仅局限于小鼠的呼吸组织，还包括脑、脾脏、胸腺、肾、肝脏和心脏等器官。小鼠全身性的病毒感染主要是因为各个脏器中都存在裂解HA蛋白的水解酶，小鼠除了出现呼吸症状外还会表现出后肢麻痹等神经系统症状。但也有例外，当用高剂量的并无多个碱性裂解位点的A/WSN/1933（H1N1）毒株滴鼻感染小鼠，小鼠脑组织也会感染病毒并出现神经症状。所以仅有受体分布并不能完全决定流感病毒的宿主范围。

制作流感病毒感染动物模型多应用SPF级雌性BALB/c小鼠，4-6周龄。

将分离得到的H9N2病毒毒株（A/brambling/Beijing/16/2012，Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)在小鼠体内进行连续传代，纯化病毒，得到3个鼠肺适应株，命名为：P12-1、 P12-2、 P12-3。

基于P0，P12-1，P12-2，P12-3代病毒对小鼠模型的毒力与致病性比较，攻毒后24h，在P12-2和P12-3病毒的A组，每盒内各放入4只未攻毒的小鼠，第5，8天各解剖2只，取肺组织，每组剩余的4只于21天采血，通过血凝抑制实验及微量中和实验测定抗体效价。

1、鼠肺适应株P12-2、P12-3病毒在小鼠群体间的接触传播力研究

每盒9只小鼠中5只被攻毒的小鼠于感染后5天内全部死亡，P12-2病毒组同居小鼠第5天及第8天肺组织检测不到病毒，而P12-3病毒组第8天解剖的两只同居小鼠肺组织检测均为阳性，病毒滴度分别为3.5和3.375(Log10EID50/100ul)。将PCR产物外送测序证实其与攻毒毒株P12-3 100%同源（表1）。然而，P12-3同居小鼠第14天的血清经血凝抑制实验检测，其中只有一只小鼠的HI检测滴度为40，其它3只检测结果均为阴性。以上结果证实经过鼠肺适应后P12-3毒株可在小鼠群体间进行有效传播，但诱发机体体液免疫保护程度较弱。

表1 P12-2、P12-3病毒在小鼠群体间的接触传播