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C57BL/6J
扩增并经测序比对正确的Dkk3片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达Dkk3表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,用ICR小鼠作假孕受体,制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型(图1)。
图1 Dkk3 转基因表达载体
3月龄的Dkk3转基因小鼠和同窝阴性小鼠进行心脏超声影响分析(图2和表1),结果显示,Dkk3转基因小鼠舒张期左室前壁厚度(LVAW, diastolic)增加8.5%,舒张期左室后壁厚度(LVPW, diastolic)增加8.6%,收缩期容积(LV volume, systolic)减小12.0%,舒张期容积(LVvolume, diastolic)减小58.2%。
图2 小鼠心脏M型超声影像截图
注:对3月龄野生型小鼠(A)和转基因阳性小鼠(B)进行M型超声影像检查
表1 Dkk3和野生型小鼠M型超声参数
参数
Parameters
心率
Heart
Rate
(bmp)
收缩期左室前壁厚度
LVAW,
systolic
(mm)
舒张期左室前壁厚度
diastolic
收缩期左室后壁厚度
LVPW,
舒张期左室后壁厚度
收缩期左室内径
LVESD
野生型
Wild type
N=24
420±59
1.08±0.1
0.71±0.1
0.89±0.1
0.58±0.1
2.37±0.2
转基因
Transgene
N=19
439±27
1.12±0.1
0.77±0.1**
0.90±0.1
0.63±0.1*
2.25±0.2
舒张期左室内径
LVEDD
收缩其左室容积
LV Volume systolic
(uL)
舒张期左室
容积
LV Volume diastolic
左室质量
(校正值)
LV Mass,
corrected
(mg)
射血分数
EF
(%)
短轴内径缩短率
FS
3.69±0.2
19.96±5.1
58.19±8.5
62.2±11.2
66.2±5.6
36.1±4.3
3.56±0.2*
17.58±4.5
53.21±6.8*
65.5±12.0
67.1±6.3
36.7±4.9
注:* P<0.05,**P<0.01Note:* P<0.05,**P<0.01
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