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SPF级6-8周龄鼠,C57BL/6J小鼠(CD45.2), B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠(B6.SJL,CD45.1)。
细胞:293T
表达载体:pMSCV‐AE9a‐E2A‐Rac1‐V12‐IRES‐GFP。
可使用SPF级别的6-8周龄鼠, C57BL/6J小鼠(CD45.2), B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠(B6.SJL,CD45.1)。
取B6.SJL小鼠的骨髓细胞,利用C-kit+磁珠,富集C-kit+造血干祖细胞
富集的小鼠C-kit+造血干祖细胞,体外感染表达pMSCV‐AE9a‐E2A‐Rac1‐V12‐IRES‐GFP的逆转录病毒,感染后培养48h。
感染后的C-kit+造血干祖细胞利用流式细胞仪分选出GFP+的细胞,通过尾静脉注射到致死剂量照射的C57BL/6J小鼠体内,每周检测GFP+细胞的比例。
细胞回输后小鼠症状表现为:竖毛、弓背。
在细胞回输后的一周后,每周检测外周血GFP+细胞的比例,有出现GFP+细胞,即为模型成功。
表现为体重减轻、弓背竖毛,在回输后的一个月后死亡。
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