白消安诱导小鼠骨髓抑制模型

C57BL/6J小鼠。

1.实验小鼠SPF级雄性C57小鼠35只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供［SCXK（京）2014-0004］。饲养于中国医学科学院医学实验动物研究所屏障环境动物房［SYXK（京）2015-0035］，实验方案通过医学实验动物研究所实验动物管理和使用委员会（IACUC）审批，IACUC号为：MAM16003。动物实验经过福利伦理审查，符合3R原则。

2. 小鼠分组和给药 白消安（busulfan）购自于sigma。白消安粉末由DMSO配置为80mg/ml作为母液贮存，使用时用PBS稀释为所需浓度。小鼠分为对照组，低剂量给药组（20mg/kg）和高剂量给药组(40mg/kg)，每组5只。腹腔注射，高剂量给药组分两天给药，每天给予20mg/kg。对照组小鼠给予等体积含5%DMSO的PBS作为对照。

3. 造血干细胞和造血祖细胞比例测定 分离的骨髓细胞，调整细胞浓度到1´107/ml，每只小鼠取100ul细胞用于后续染色。按体积比1:50加入biotin标记的混合一抗抗体CD4，CD8， B220，Ter119，Gr1，CD11b，均购自BD bioscience，4℃条件下孵育30min，PBS洗涤一次，离心条件为1400r/min，5min。离心后弃去上清，保持100ul体积，加入混合抗体Streptavidin（percp标记），scal-1（PE标记），ckit（APC标记），CD34（FITC标记），以上抗体均购自BD bioscience。4℃条件下孵育1h。之后PBS洗涤两次，离心条件如上。BD流式细胞仪（FACS AriaTMII，BD）检测造血祖细胞（Lin-c-kit+ Sca1-or LKS- cells），造血干细胞（Lin- c-kit+ Sca1+ or LKS+ cells），长期造血干细胞（CD34-Lin-c-kit+ Sca1+）在骨髓中所占的比例。