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人胰腺癌细胞SW1990源自一位56岁的男性白人,人胰腺癌细胞株SW1990为高转移人胰腺癌细胞株,1978年取自一名58岁胰尾癌并脾转移的男性患者,CEA阳性,1979年患者死于肝转移。经组织培养,呈现上皮样细胞特征;接种裸鼠后,组织病理学上类似于原发癌,肿瘤呈现高分化的腺癌样生长。SW1990由美国学者Kyriazis等建株,SW1990高肝转移的人胰腺癌细胞株具有侵袭力强、转移效率高和转移范围大的特点,常用来深入研究胰腺癌肝转移机理的理想细胞系。利用脂质体2000将绿色荧光标记表达载体chicken β-actin-GFP-NEO转染SW1990细胞,通过G418抗生素筛选到一株稳定高表达绿色荧光蛋白(GFP)的单克隆人胰腺癌细胞SW1990,命名为SW1990-eGFP,该单克隆细胞在荧光显微镜下呈强荧光,荧光较均匀的分布于整个细胞内,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP , 细胞形态和未转染细胞无明显区别(图1)。
图1 绿色荧光表达载体的构建和SW1990稳定高表达GFP的单克隆细胞株(200×)
将对数生长期的SW1990-eGFP细胞皮下接种于2只BALB/c裸鼠,接种细胞数量为1×106/只, 采用活体荧光影像系统摄像动态观察。模型制作采用的BALB/c裸鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。
分别在接种后的7、14、21、28、35d观察裸鼠皮下肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到肿瘤荧光,通过肿瘤组织发出的荧光的光子数确定肿瘤的大小,随着观察天数的增加,肿瘤的体积和发光强度增加,且具有很好的相关性(图2)。
图2,皮下接种SW1990-eGFP肿瘤生长影像分析
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