辐射诱导长期小鼠造血系统损伤模型

荧光标记抗体NK1.1-FITC购于Biolegend公司；CD11b-APC，购于Invitrogen公司；B220-percp、F4/80-PE、CD4-PE-cy7、CD8a-APC-cy7购于BD公司；B220-percp-cy5.5、CD3-APC购于biolegend公司。EDTA-K3购于sigma公司。红细胞裂解液购于Invitrogen公司。大鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒购于索莱宝公司。EasySep™ Mouse T Cell Isolation Kit购于STEMCELL Technologies公司。全自动血液分析仪MEK-7222K（日本光电）；BD流式分析仪（BD FACSAria II cell sorter，BD Bioscience ）。铯源伽马射线辐照仪（Gammacell-40，加拿大原子能有限公司）。

实验方法

1.小鼠分组和照射

小鼠均分为三组：对照组（假照射组），4Gy IR组（4Gy组），6Gy IR组（6Gy组）,照射剂量率为1Gy/min。小鼠于SPF级动物房中饲养，照射后每天观察记录体重变化。

2小鼠外周血常规检测

小鼠TBI 后6 m小鼠眼眶静脉丛取血，抗凝管收集外周血，全自动血液分析仪测定外周血中白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）和血小板（PLT）等指标。

3小鼠胸腺、脾脏指数测定

小鼠TBI 后6 m称重安乐死，取胸腺、脾脏并称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器(mg)/体重(g)。

4 外周血免疫细胞和脾脏淋巴细胞分型检测

小鼠TBI后6 m，将分离的小鼠脾脏研磨制备脾细胞悬液。分别取外周血和细胞悬液50 μL，各加入1 mL 1×红细胞裂解液，室温条件下裂解8min（期间混匀两次），1500 r/min离心5 min，4℃。弃上清，保持每个样本100 μL体系，加入对应的混合抗体，冰上避光孵育30 min。2 mL PBS洗一遍，离心条件不变。加入300 μL PBS过滤到流式管中，上机检测。

5 脾脏T细胞分离及P16 mRNA表达量检测

小鼠TBI后6 m，按索莱宝ficoll试剂盒和STEMCELL Technologies的T细胞阴选试剂盒说明书方法进行分离。将收集的细胞重悬计数，按每1~5 × 106个细胞加入1 mL trizol保存，送至上海欧易生物医学科技有限公司检测P16 mRNA表达量。

6统计学方法

采用GraphPad Prism 6软件(San Diego，CA，USA)处理数据、作图，计量资料数据用均数±标准差（x ̅± s）表示，组间差异采用ANOVA检验和卡方检验。以P< 0.05 为差异有统计学意义。

我们的承诺

　　北检检测技术研究院承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。