基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型

1、实验材料：SIVmac239病毒；选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。

2、静脉途径SIV恒河猴感染模型制作方法：

先用宠物用电推剪推去猴上肢采血部位的猴毛，左手抓住一侧后肢跗关节部位，使后肢皮下静脉怒张。用75%酒精酒精棉球消毒。右手拿吸取病毒液的注射器，针头沿静脉平行方向向向心端刺入血管，见回血后，左手放松，不再紧压，右手缓慢将病毒液推入。完毕后用干棉球压迫止血，将注射器拔出，弃在利器专用桶内。

3、给药方法：将建立稳定的SIVmac239慢性感染的恒河猴，经皮下注射TFV/FTC/DTG，每天给药一次，连续给药6个月。

4、样本收集和检测：定期收集外周血样本，提取病毒RNA和病毒DNA，测定血浆病毒载量、总病毒DNA、ALU-PCR和Q-VOA。

1、血浆病毒载量变化情况：

SIV成功感染恒河猴后，造成血浆病毒血症。通过给予高效抗逆转录病毒疗法（HAART），将血浆病毒载量抑制在低水平或基本检测不到的水平。停止HAART治疗，血浆病毒载量出现反弹。

图1 基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型的血浆病毒载量结果

2、免疫检测指标情况：

SIV感染恒河猴在疾病慢性期血浆病毒载量高；经HAART治疗后，3只猴的血浆病毒载量均呈低水平复制。停药之后，血浆病毒载量出现反弹。SIV感染恒河猴LIA 2和LIA 3的CD4细胞数明显上升。停药之后，CD4细胞数会再次减少。SIV感染恒河猴LIA 2和LIA 3的在进行药物治疗后，随着病毒载量的降低，CD4/CD8比值升高。停药CD4/CD8比值降低。

图2 基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型的免疫检测指标结果

SIV感染恒河猴在疾病慢性期CD4持续下降；经HAART治疗后，血浆病毒载量呈低水平复制，同时CD4细胞数明显上升。停药之后，CD4细胞数会再次减少。有些个体在慢性感染阶段出现CD4/CD8比值倒置，在进行药物治疗后，随着病毒载量的降低，CD4/CD8倒置现象缓解，停药后可能再次出现CD4/CD8倒置。有些个体在疾病不同阶段会腹泻、厌食、体重减轻等临床表现，其临床表现与药物治疗相关。

图3 基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型血浆病毒载量与免疫检测指标结果比对

3、发病过程比较：

建立的潜伏感染动物模型与人类有着相似的艾滋病发病过程。在感染艾滋病毒后会经历急性期，大约为50天。攻毒50天之后便进入慢性感染阶段。经历了约70周的慢性感染阶段，给与感染猴20周HAART药物治疗。感染动物的发病过程也与是否进行药物治疗有关。不同疾病阶段的临床表现不同。

图4基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型与临床发病过程模拟结果

表1基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型与艾滋病患者临床表型比对

4、病毒DNA和整合病毒DNA变化情况：

药物治疗期间一直可以检测到病毒的Total DNA。在治疗前，通过Alu-PCR定性检测，判断3只感染猴中有整合的病毒DNA存在。在治疗过程中，应用建立的Alu-PCR定性检测，发现3只感染猴体内一直存在整合的病毒DNA。

图5基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型总病毒DNA和整合性病毒DNA结果

5、具有复制潜能的定量病毒生长检测（Q-VOA）

感染猴在HAART药物治疗过程中，血浆病毒载量降低到现有水平的检测线下。通过QVOA检测，发现外周血的Resting CD4+细胞中存在具有复制能力的病毒，这些病毒在药物治疗期间潜伏在宿主细胞中。

图6 基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型Q-VOA结果