小鼠膀胱癌移行细胞BTT绿色荧光标记肿瘤模型

BTT739为低分化小鼠膀胱移行细胞癌，T739近交系小鼠经化学致癌剂BBN诱导产生的膀胱肿瘤，诱导26周时，将其中1只雄性小鼠膀胱癌往同种系小鼠皮下移植获成功。并培养成细胞系。在同系小鼠移植成功率100%，无自然消退现象，带瘤小鼠平均存活54天。

T739近交系小鼠是天津医药科学研究所培育的一株土黄色近交系小鼠，是615近交系小鼠和昆明种小鼠杂交后兄妹交配培育成功的。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达（图1）。

图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建

2. BTT739-eGFP荧光细胞的获得：采用脂质体2000转染小鼠膀胱癌移行细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养，细胞形态见图2。

图2 BTT739-eGFP细胞形态

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取T739小鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。观察前每只小鼠腹腔注射饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

本模型将GFP基因转染到BTT739中得到了高表达GFP细胞株。将BTT739-GFP细胞经皮下接种至T739小鼠，用活体荧光成像系统连续观察。在皮下接种后第7天，用生物发光成像系统可以观察到肿瘤发光, 随着观察天数的增加，肿瘤面积增大（图3），荧光强度增强（图4）。

图3荧光标记肿瘤的生长曲线

图4皮下接种BTT-GFP肿瘤生长影像分析