SIVmac251阴道途径感染恒河猴模型

2023-12-21 15:54:52

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摘要：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至20
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标识符	CSTR:16397.09.0G16000443
资源中文名称	SIVmac251阴道途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravaginally infected with SIVmac251
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株，病毒原液TCID50为2×107/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位，后肢抬高，暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将1mL SIVmac251病毒原液缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、SIVmac251阴道感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、42、56天采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血浆病毒载量、CD4+/CD8+比值及血浆抗体测定。 5、SIVmac251阴道感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SIVmac251阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值。 7、SIVmac251阴道感染猴血浆抗体测定：免疫荧光法（IFA）检测感染猴血浆中的抗体水平。
模型表型数据	1、临床症状实验猴在感染后14天出现食欲减退，并持续两周左右，体重有所下降，有浅表淋巴结肿大。 2、SIVmac251阴道感染恒河猴外周血病毒载量结果 S142猴经SIVmac251阴道感染后10d检出病毒载量阳性，之后迅速上升，在14d达到高峰，峰值为6.48×107，随后迅速下降（图1）。分别经三种不同途径（静脉途径、直肠途径和阴道途径）感染的实验猴在SIVmac251感染后血浆病毒载量的变化趋势基本一致，但病毒检出时间稍有不同，首先是静脉感染猴S153在3d检出阳性，其次为直肠感染猴S172在7d检出阳性，最后是阴道感染猴S142在10d检出阳性。图1 SIVmac251不同途径感染恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 Viral load in plasma of SIVmac251-inoculated rhesus monkeys by different route 3、SIVmac251阴道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 S142猴经SIVmac251阴道感染后CD4+/CD8+比值持续下降到第7d开始回升，到第10d时出现一个反弹峰，随后CD4+/CD8比值又继续下降，直到28天时下降到最低点，发生比例倒置。在急性期，S142猴的CD4+/CD8+比值一直在1以下波动。（图2）。三只不同途径感染的实验猴CD4+/CD8+变化趋势基本保持一致，S172（直肠感染猴）和S142（阴道感染猴）倒置的比S153（静脉感染猴）严重。图2 SIVmac251不同途径感染恒河猴CD4+/CD8+比值 Fig.2 CD4+/CD8+ ratio of SIVmac251-inoculated rhesus by different route 4、SIVmac251阴道感染恒河猴血浆抗体检测结果 S142猴经SIVmac251阴道感染后在第14d时血浆抗体均转为阳性，在21d时血浆抗体滴度缓慢上升，到42d时开始急剧上升，直到第56d，血浆抗体最高到1:640（图3）。静脉感染猴S153在第10d时最早检出阳性，随后抗体滴度平缓上升，直到第56d；直肠感染猴S172在第14d时血浆抗体均转为阳性，在21d时S172血浆抗体滴度迅速上升，42d时S172开始急剧上升，直到第56d，S172最高到1:1280。图3 SIVmac251不同途径感染恒河猴血浆抗体检测结果 Fig.3 The result of antibody in plasma after SIVmac251 inoculate rhesus by different route
动物模型的评价与验证	用导尿管将病毒缓慢注入猴阴道内，建立异性性传播动物模型，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究

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