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心脏组织特异性过表达CNN1转基因小鼠模型
扩增并经测序比对正确的CNN1片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达CNN1表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析CNN1蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(ILAS-GC-2012-001)。
图1. CNN1转基因小鼠模型的建立及鉴定
将CNN1基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体(A),Western Blot分析CNN1蛋白表达(B)及灰度扫描定量分析(C, n=3, **P <0.01versus NTG).
图2. CNN1转基因小鼠生存率分析
至8月龄时,对照小鼠（n=67）及CNN1转基因小鼠（n=34）无死亡发生, 经Spss16.0软件Kaplan-Meier curves分析, CNN1的表达使得cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠（n=59, ***P < 0.001）的存活率提高了14%（DTG mice, n=25, ##P < 0.01）.
图3. CNN1转基因小鼠超声参数分析
NTG, CNN1, cTnTR141W及DTG四组小鼠于1, 3, 6, 8月龄时超声参数LVEDD（A）, LVPWD（B）及LVFS（C, LVEDD:左室舒张末期内径;LVPWD: 左室舒张末期后壁厚度; FS%: 短轴缩短率）分析; 经阿霉素处理后CNN1转基因小鼠心脏声参数LVEDD（D）, LVPWD（E）及LVFS（F）分析,*P <0.05; **P <0.01;***P <0.001.
图4. CNN1转基因小鼠心肌组织学分析
6月龄时NTG, CNN1, cTnTR141W及DTG四组小鼠心脏切片H&E染色整体(A)及高倍(B)截图, 心脏切片Masson染色(C), Col3a1表达(D)及灰度扫描定量分析(E, n=3, *P <0.05, **P <0.01versus NTG, ##P <0.01versus DTG), 及心肌组织投射电镜分析(F).
图5. CNN1转基因小鼠心肌组织εPKC/ERK/mTOR信号通路分析
6月龄时NTG, CNN1, cTnTR141W及DTG四组小鼠心脏组织中CNN1,εPKC, ERK及mTOR的表达(A)及灰度扫描定量分析(B-D, n=3, *P <0.05, **P <0.01, **P <0.01versus NTG; #P <0.05, ##P <0.01versus DTG).
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2023-12-21 15:26:28
