动物模型

小鼠模型

心肌组织特异性过表达Nrgn转基因小鼠 YOXDE小鼠 6OHDA小鼠PD模型心脏特异性表达CNN1转基因小鼠 KM突变慢性炎症小鼠模型 Tet2敲除小鼠 PF4cre小鼠三转基因银屑病小鼠模型无菌PAP转基因小鼠全身性表达IL25转基因小鼠
鹌鹑模型

高蛋白高钙饮食合并限制饮水建立鹌鹑痛风模型鹌鹑高尿酸血脂代谢症动物模型建立高尿酸血症鹌鹑肠道菌群结构分析鹌鹑动脉粥样硬化模型高脂高嘌呤饮食联合氧嗪酸钾诱导鹌鹑糖脂代谢紊乱模型建立
大鼠模型

海马组织特异表达cre工具大鼠心脏特异性过表达DHCR24转基因大鼠 CYP3AA1A18基因敲除大鼠 NLGN2条件性敲除大鼠 Isca1心肌特异性基因敲除SD大鼠 Defb23基因敲除大鼠 Dlg3Cre工具大鼠 LATEXINcre工具大鼠肠胀气大鼠H1细小病毒感染模型乳腺组织特异表达GNG2cre工具大鼠
疾病模型

人胰腺癌细胞SW1990荧光素酶标记肿瘤模型结核豚鼠模型（含耐药株）A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染北京鸭模型荧光素酶标记的人胰腺癌细胞capan2胰腺原位接种肿瘤模型 H5N1禽流感病毒布氏田鼠模型 H5N1禽流感病毒气溶胶吸入感染雪貂模型 A/Vietnam/1203/2004(H5N1)滴鼻途径感染雪貂模型口腔白色海绵状斑痣角蛋白缺陷疾病转基因动物模型长期高尿酸血症慢性肾损伤模型绿色荧光标记人胰腺癌细胞SW1990皮下接种裸鼠肿瘤模型
犬鼠模型

犬扩张型心肌病变模型建立右心室起搏致心力衰竭犬模型犬动物模型：锥形非血管化膀胱移植输尿管重建静脉注射大肠杆菌制备高动力型感染性休克犬模型 ApoE基因突变犬动脉粥样硬化及临床并发症模型犬自体同源颅骨成形术模型的建立 A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染比格犬模型富血小板血浆协同改善Beagle犬手术诱导的骨关节炎模型建立
羊类模型

陕北细毛羊动物模型构建蒙古羊动物模型构建湖羊模型建立西藏羊动物模型构建兰州大尾羊模型构建鲁中山地绵羊动物模型构建小尾寒羊动物模型构建鄂尔多斯细毛羊动物模型构建
猪类模型

甲型H1N1流感病毒气管插管感染猪模型 H5N1气管镜感染猪模型双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪动物模型 A/Vietnam/1194/2004（H5N1）经气管途径感染猪模型 A/California/07/2009(H1N1)经气管途径感染猪模型免疫抑制剂诱导小耳畸形猪模型
鱼类模型

急性白血病斑马鱼模型心肌损伤斑马鱼模型耳功能损伤斑马鱼模型 ddx18基因敲除导致的斑马鱼白血病模型非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）斑马鱼模型帕金森疾病（PD）斑马鱼模型丙型肝炎病毒亚复制子斑马鱼模型
猴类模型

H5N1禽流感病毒恒河猴模型 SIVmac251阴道途径感染恒河猴模型 SHIV1157ipd3N4直肠途径感染恒河猴模型 SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型气管镜感染MERSCoV绒猴模型基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型新型冠状病毒再感染恒河猴模型 SHIV1157ipd3N4阴道途径感染恒河猴模型 SHIVKU1静脉途径感染恒河猴模型 SHIVSF162P3静脉途径感染恒河猴模型
兔类模型

新西兰兔骨缺损动物模型实验性牙槽突裂兔模型过敏性紫癜兔模型心肌铁过载兔模型的制作兔模型：术后镇痛效果临床评价 SARSCoV滴鼻途径感染新西兰兔模型心搏骤停兔模型构建鼠疫菌的豚鼠和新西兰兔模型建立

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C9ORF72基因敲除大鼠

2023-12-21 15:33:08

原创版权

摘要：　　肌萎缩侧索硬化（ALS）也叫运动神经元病（MND），后一名称英国常用，法国又叫夏科（Charcot）病，而美国也称卢伽雷（Lou Gehrig）病。我国通常将肌萎缩侧索硬化和运动神经元病混用。它是上运动神经元和下运动神经元损伤之后，导致包括球部（所谓球部，就是指的是延髓支配的这部分肌肉）、四肢、躯干、胸部腹部的肌肉逐渐无力和萎缩。患病率约为4-6/10万。大约10%的ALS病例是家族型的，90%是散发型的。

　　2018年5月11日，国家卫生健康委员会等5部门联合制定了《第一批罕见病目录》
注：因业务调整，暂不接受个人委托测试。

项目咨询

400-062-0567

标识符

CSTR:16397.09.0A01001028

资源中文名称

C9ORF72基因敲除大鼠

资源英文名称

C9ORF72 knockout rat

疾病概述

　　肌萎缩侧索硬化（ALS）也叫运动神经元病（MND），后一名称英国常用，法国又叫夏科（Charcot）病，而美国也称卢伽雷（Lou Gehrig）病。我国通常将肌萎缩侧索硬化和运动神经元病混用。它是上运动神经元和下运动神经元损伤之后，导致包括球部（所谓球部，就是指的是延髓支配的这部分肌肉）、四肢、躯干、胸部腹部的肌肉逐渐无力和萎缩。患病率约为4-6/10万。大约10%的ALS病例是家族型的，90%是散发型的。　　2018年5月11日，国家卫生健康委员会等5部门联合制定了《第一批罕见病目录》，肌萎缩侧索硬化被收录其中。

实验动物背景信息

SD大鼠

模型制作方法

3.1 实验材料

3.1.1 实验动物

SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司【SCXK（京）2012-001】。实验中涉及动物的操作程序已获得中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准，批准号为ZLF18003.

3.1.2实验仪器

仪器及耗材	生产厂商
NanoZoomer S60数字病理切片扫描仪	日本滨松光子学株式会社
Vevo770小动物超声影像系统	VisualSonics
激光共聚焦扫描显微镜	Leica
透射电子显微镜	JEOL
显微注射仪	Nikon
光学显微镜	Nikon
化学发光凝胶成像系统	BIO-RAD
PCR仪	BIO-RAD
组织脱水机	Leica
石蜡切片机	Leica
石蜡包埋机	Leica
冰冻切片机	Leica
电泳仪	BIO-RAD
电泳槽	Tanon
数码凝胶图像处理系统	Tanon
组织匀浆机	POLYTRON
恒温培养箱温控振荡箱	Incucell TAITEC
离心机	Eppendorf
摇床	SCILOGEX
塑料薄膜封口机	德清拜杰有限公司
电动鼓风干燥箱	天津市泰斯特仪器有限公司
电子称量器（量程0.5g-620g）	奥豪斯仪器（常州）有限公司
电子称量器（量程0.1mg-220g）	Sartorius
4℃冰箱	海尔集团
-80℃冰箱	SANYO
-20℃冰箱	SANYO
涡旋振荡器	上海沪西分析仪器厂
移液器	Eppendorf

3.1.3实验试剂

试剂	生产厂商
体外转录用试剂盒	Ambion
Taq DNA聚合酶	TaKaRa
T7 转录试剂盒	Invitrogen
T4 DNA裂连接	TaKaRa
胶回收试剂盒	Qiagen
质粒提取试剂盒	Axygen
Trizol试剂	Invitrogen
逆转录试剂盒 DNA提取试剂盒	Invitrogen 北京全式金生物科技有限公司
C9orf72（66140-1-lg）抗体	proteintech
Purified Mouse Anti-GM130（610822）	BD
Anti-Giantin antibody(ab37266)	Abcam
Anti-Rab5 antibody(ab18211)	Abcam
Anti-RAB7 antibody(ab137029 )	Abcam
Anti-Rab11 antibody (ab3612)	Abcam
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 （A11029 ）	Invitrogen
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 555 （A21424 ）	Invitrogen
Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 555 （A31572）	Invitrogene
GADPH	Santa Cruz Biotechnology
NC膜	Millipore
化学发光液	Immuno Cruz
蛋白质分子量标记物	Takara
蛋白酶抑制剂	罗氏
组织裂解液	Thermo
丽春红	Beyotime
BCA试剂盒	Beyotime
Western blot 洗液（10×）	Beyotime
30%Acr-Bis	Beyotime
SDS-PAGE电泳液	Beyotime
Western blot转膜液（粉剂）	Beyotime
TEMED	Beyotime
过硫酸铵	Beyotime
1.5 M Tris·HCl（pH=8.8）缓冲液	Beyotime
1 M Tris·HCl（pH=6.8）缓冲液	Beyotime
琼脂	BD公司
异丙醇	北京化工厂
脱脂奶粉	内蒙古伊利实业集团股份有限公司

3.1.4模型构建流程

设计方案

构建sgRNA 载体pUC57-sgRNA expression vector，根据基因信息选择靶点并合成sgRNA。

靶点1:

ccC caccatctcctgctgttg

靶点2:

aacggagatcggagcactta cgg

合成的sgRNA单链通过退火复性结合成小片段，插入BSA I线性化的载体，构建完成的sgRNA载体通过体外转录成为可注射的sgRNA。
构建Cas9载体pST1374-NLS-flag-linker-Cas9，载体通过体外转录成为可注射的Cas9-RNA。
显微注射

超数排卵：15只3-4周龄SD雌鼠注射激素进行超排。
受精卵注射：取约150枚受精卵进行注射。
雄鼠结扎：制作30只8周龄输精管结扎的SD雄鼠。
受体鼠制备：8-10周龄SD雌鼠与结扎的SD雄鼠交配后选取见栓的雌鼠。
胚胎移植：将注射后的受精卵移植到受体鼠输卵管壶腹部（移植一次，150枚卵，5只受体鼠）。

基因型鉴定

剪尾编号：出生7-10天的乳鼠，剪取脚趾和尾尖进行编号及取材。
基因组DNA提取：使用基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA
PCR检测：根据序列信息设计检测引物并进行PCR检测。

结果分析：选取通过PCR检测后含有不同于野生型分子量条带的鼠号，将PCR产物进行TA克隆，之后用检测引物进行菌液PCR，筛选有插入的克隆测序。

根据测序结果确定C9ORF72基因敲除模型大鼠（SD. C9ORF72(tm)-GC/ILAS，http://www.ratresource.com）用于后续实验。

模型表型数据

1，C9ORF72基因敲除大鼠的建立

2，C9ORF72基因敲除和兴奋毒性共同诱导运动缺陷

3，C9ORF72基因敲除和兴奋毒性联合作用导致运动神经元丢失

4，C9ORF72基因敲除大鼠脊髓免疫荧光染色分析

5，兴奋毒性诱导与不诱导的WT和C9orf72敲除大鼠脊髓细胞RNA测序分析

动物模型的评价与验证

保存方式

冷冻保存、活体繁殖

合作方式

我们的承诺

　　北检检测技术研究院承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。

中析实验室

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