动物模型

小鼠模型

主动脉弓缩窄术诱导小鼠心肌肥厚模型 PDGFhαSynuclein转基因帕金森病小鼠模型 CTLA4基因敲除小鼠模型条件性RNVU118过表达小鼠模型 NUP210敲除小鼠 APPPS1转基因阿尔兹海默病小鼠模型 PDE4D敲除小鼠免疫系统人源化小鼠模型 Mapk9敲除小鼠 LOXGF小鼠
鹌鹑模型

高脂高嘌呤饮食联合氧嗪酸钾诱导鹌鹑糖脂代谢紊乱模型建立鹌鹑高尿酸血脂代谢症动物模型建立高尿酸血症鹌鹑肠道菌群结构分析高蛋白高钙饮食合并限制饮水建立鹌鹑痛风模型鹌鹑动脉粥样硬化模型
大鼠模型

Latoxin基因敲除大鼠 APOE基因敲除动脉粥样硬化大鼠模型 Ndst4Cre工具大鼠颈脊髓压迫大鼠模型 Iscalcre工具大鼠 MIR451基因敲除大鼠 Dlg3Cre工具大鼠氧嗪酸钾致大鼠急性高尿酸血症动物模型 Epha4敲除大鼠 Mef2c基因敲除大鼠
疾病模型

Cre报告品系长期高尿酸血症慢性肾损伤模型 A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染白来航鸡模型人结肠腺癌细胞HCT8绿色荧光标记肿瘤模型动脉粥样硬化动物模型轻症EV71动物模型人结直肠癌细胞HCT116绿色荧光标记肿瘤模型人结直肠癌细胞HCT116红色荧光标记肿瘤模型肌苷致树鼩急性高尿酸血症泊洛沙姆407（P407）诱导的金黄地鼠脂代谢紊乱模型
犬鼠模型

犬自体同源颅骨成形术模型的建立 ApoE基因突变犬动脉粥样硬化及临床并发症模型右心室起搏致心力衰竭犬模型富血小板血浆协同改善Beagle犬手术诱导的骨关节炎模型建立犬扩张型心肌病变模型建立犬动物模型：锥形非血管化膀胱移植输尿管重建 A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染比格犬模型静脉注射大肠杆菌制备高动力型感染性休克犬模型
羊类模型

湖羊模型建立西藏羊动物模型构建鲁中山地绵羊动物模型构建小尾寒羊动物模型构建陕北细毛羊动物模型构建兰州大尾羊模型构建鄂尔多斯细毛羊动物模型构建蒙古羊动物模型构建
猪类模型

H5N1气管镜感染猪模型双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪动物模型免疫抑制剂诱导小耳畸形猪模型 A/California/07/2009(H1N1)经气管途径感染猪模型 A/Vietnam/1194/2004（H5N1）经气管途径感染猪模型甲型H1N1流感病毒气管插管感染猪模型
鱼类模型

急性白血病斑马鱼模型心肌损伤斑马鱼模型耳功能损伤斑马鱼模型 ddx18基因敲除导致的斑马鱼白血病模型帕金森疾病（PD）斑马鱼模型丙型肝炎病毒亚复制子斑马鱼模型非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）斑马鱼模型
猴类模型

结核猴模型（含耐药结核猴模型）SIVmac251静脉途径感染恒河猴模型 SHIVSF162P3直肠途径感染恒河猴模型猕猴局部脑缺血模型 SIVmac251直肠途径感染恒河猴模型 SHIV1157ipd3N4阴道途径感染恒河猴模型 H5N1禽流感病毒食蟹猴模型帕金森疾病恒河猴基因修饰模型 SIVmac251阴道途径感染恒河猴模型 SIVmac239直肠途径感染恒河猴模型
兔类模型

实验性牙槽突裂兔模型兔模型：术后镇痛效果临床评价心肌铁过载兔模型的制作 SARSCoV滴鼻途径感染新西兰兔模型新西兰兔骨缺损动物模型心搏骤停兔模型构建过敏性紫癜兔模型鼠疫菌的豚鼠和新西兰兔模型建立

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可诱导型心脏Drd5基因条件性敲除小鼠模型

2023-12-21 15:23:21

原创版权

摘要：慢性心力衰竭（Chronic heart failure, CHF）是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈或射血能力受损的复杂临床综合征, 是多种心脏病终末阶段的临床表现。慢性心衰患者的再入院死亡率每年约为 20%，五年死亡率接近 50% 。因此，在机体出现心衰之前早期防治应该是治疗研究的重点，阻止心肌损伤和重构，是降低心衰发生发展的关键。

本研究设计基于同源重组理论，利用胚胎干细胞打靶及显微注射技术，构建了Drd5floxp/flox小鼠，利用Cre/LoxP系统复制Drd5在心肌细胞可诱
注：因业务调整，暂不接受个人委托测试。

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标识符

CSTR:16397.09.0I01000716

资源中文名称

可诱导型心脏Drd5基因条件性敲除小鼠模型

资源英文名称

Drd5flox/flox, Myh6 CreERT2

疾病概述

慢性心力衰竭（Chronic heart failure, CHF）是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈或射血能力受损的复杂临床综合征, 是多种心脏病终末阶段的临床表现。慢性心衰患者的再入院死亡率每年约为 20%，五年死亡率接近 50% 。因此，在机体出现心衰之前早期防治应该是治疗研究的重点，阻止心肌损伤和重构，是降低心衰发生发展的关键。本研究设计基于同源重组理论，利用胚胎干细胞打靶及显微注射技术，构建了Drd5floxp/flox小鼠，利用Cre/LoxP系统复制Drd5在心肌细胞可诱导性条件敲除小鼠(Drd5flox/flox, Myh6 CreERT2)，在成年后特异性心脏敲除Drd5，得到可稳定遗传、既有明显表型又保持原有生存率的心肌病模型.该小鼠给予他莫昔芬诱导后两周表现为左心室肥厚，6周后射血分数和短轴缩短率持续降低，心腔扩大，室壁变薄，心肌纤维增多，心功能严重受损。

实验动物背景信息

C57BL/6小鼠

模型制作方法

一、模型设计原理：

GRNA介导Cas9蛋白剪切目标外显子两端的内含子DNA，同时提供同源模板Donor，基因组两端通过同源重组修复方式进行DNA修复，在特定外显子两端插入FloxP。Drd5-FloxP小鼠与组织特异性表达Cre小鼠交配，从而实现Drd5基因条件性敲除的目的。实验采用最新的spCas91.1进行注射，减少了基因组中的off-Target。

根据Drd5基因组结构和蛋白功能保守区分析可知：Exon2（aa1-478）为公共外显子，位于蛋白功能保守区上：7tm_GPCRs superfamily domain，条件性删除这个外显子后，将破坏7tm_GPCRs superfamily domain,蛋白失活。因此决定在Exon1的两边定点插入FloxP位点，实现将Exon1条件性敲除。

Drd5基因存在1种转录产物，见下图：

http://uswest.ensembl.org/Mus_musculus/Gene/Summary?db=core;g=ENSMUSG00000026496;r=1:180568924-180601254

1）GRNA靶点设计及活性检测

在要删除的Exon1外显子两端，设计gRNA靶点如下

靶点名称	靶点序列（标灰为PAM序列）	活性分析
Drd5-L1	GCGCGCTGCCGACAGGATCGG	10%
Drd5-L2	TCCCATCCTGGGGACTAGAGG	60%
Drd5-L3	GCAGGGTGAGCGCCCCTCGGG	40%
Drd5-L4	TGACCGTCCCCAGACCCGAGG	50%
Drd5-R1	TGTTCTGTGACTTGCACCTGG	95%
Drd5-R2	GAGTGGCAATTGCTGGTATGG	95%
Drd5-R3	GCAGCAGCCCGAGAACAGGGG	85%
Drd5-R4	TTTCTCCCTGATTTGTTGTGG	85%
Drd5-R5	CACTTTCTCGTCTCTAAAGGG	95%

使用Cas9/gRNA靶点效率检测试剂盒（货号：VK007）进行gRNA体外活性检测，结果如下：

gRNA靶点活性检测结果

靶点活性数据分析如下：

根据活性检测结果，我们选用活性最高的L2,R1进行F0代首建鼠构建。

2）PCR结果分析

扩增说明

引物名称

引物序列（5’-3’）

PCR产物大小

使用如下引物进行目的条带扩增

两端floxp插入	F	CTGGGCTTGGGGCGAGGGTAT	KI-floxp：2564bp
测序	R	GAGAAACACTGAGCACCAACTG	WT：2496bp

M-CKO-M30(1-19,NC)目的带扩增琼脂糖凝胶电泳结果如下图：

M：BM2000 Marker，如右图所示

NC:阴性对照

如图所示，5♂扩出目的条带

3）Drd5floxp/flox小鼠测序结果分析

以M-CKO-M30-5小鼠测序结果为例，测序结果标注如下：

5’端FloxP比对结果：

3’端FloxP比对结果：

5♂xC57♀（1-9♂；10-18♀）用引物F2/R2扩增琼脂糖凝胶电泳结果如下图：

WT：野生型对照 NC:阴性对照，如图所示，2#,4-6#,8#,11#,16#扩出双带

5♂xC57♀（1-9♂；10-18♀）用引物F/R扩增琼脂糖凝胶电泳结果如下图：

4）Drd5floxp/flox小鼠测序结果分析

将2#，4-6#，8#，11#和16#由引物F/R做PCR得到的产物送测序，测序结果分析2#，4-6#，8#，11#和16#小鼠均为两端精确插入floxp序列的杂合子。

5）Drd5心肌细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠的繁育及鉴定结果：

Drd5floxp/flox小鼠与Cre 的小鼠（Myh6 CreERT2）杂交，对后代自交获得的小鼠进行基因型鉴定，成功获得Drd5心肌细胞诱导性条件性基因敲除小鼠Drd5myh6-creERT2）。见下图

M:Marker;3,4,5,6,8,9,10,11:Drd5flox/flox,Myh6CreERT2;1,2,5,7:Drd5flox/flox

我们的承诺

　　北检检测技术研究院承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。