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C57BL/6小鼠
1实验材料
实验动物 选择健康雄性C57小鼠小鼠,体质量18-22 g,均购于北京华阜康华生物科技股份有限公司。饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物中心动物房内,5只/盒屏障系统中,温度( 22±2) ℃,湿度50%~60%,12 h 循环照明,小鼠自由摄取食、水,IACUC号:ILAS-YZW17007。
2 方法
2.1 动物模型制备
C57小鼠根据体重,三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重,(360mg/kg体重)(三溴乙醇储存液:25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇,使用液:0.50ml储存液+39.5ml生理盐水),俯卧位固定于加热垫上保持体温,背部颈部脱毛膏脱毛,酒精消毒处理,无菌手术剪剪开后背颈部皮肤,用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间,将DOCA 缓释泵塞入皮下,镊子将该处皮肤对齐复合,无菌缝合线缝合皮肤,放置在加热板上保暖,待苏醒后放回鼠盒,手术后用止痛果冻缓解疼痛。
2.2 标本采集及处理
完成DOCA+高盐干预21天后,称体重,麻醉后腹主动脉采血至死亡,室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清,-80℃冰箱冻存。取心脏、主动脉做石蜡切片,10%中性福尔马林中固定,30%蔗糖脱水,冰冻切片包埋剂包埋并切片;进行免疫组化及免疫荧光检测,其余血管组织液氮冷冻-80℃保存,提取蛋白进行免疫印迹检测。
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