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SPF级1-10日龄乳鼠,ICR、C57或Balb/c均可。
CA16在人横纹肌瘤细胞(RD)中培养、繁殖,采用冻融法释放病毒,超速离心法富集病毒。毒株为shzh05-1,2008年分离自深圳市,GenBank存储号为EU262658。
可使用SPF级别的1-10日龄乳鼠,品系包括ICR、C57BL6J、Balb/c,母鼠自然哺乳,在动物生物安全二级实验室内独立饲养。
根据预实验确定感染剂量,10日龄乳鼠经轻度麻醉后,经腹腔注射2.5×107TCID50的CA16 shzh05-1,攻毒体积为100微升/只,空白对照组注射等量RD细胞上清。
感染后动物观察14天,记录体重变化、症状和死亡率。根据症状严重程度,参照以下标准对动物进行打分:
0,未见异常;1,竖毛;2,后肢迟缓无力;3.单后肢瘫痪;4,双后肢瘫痪;5,死亡。
分别在感染后第1天、3天、5天和7天处死动物,分离主要组织器官,提取RNA,采用实时荧光定量PCR法检测组织内病毒载量,记录病毒复制情况。PCR引物序列为:CA16-F1:GAAAAACCCTCGACACACTAG;CA16-R1: ATCAGCGTCCTTGCAATACTCG(1095)
分别在感染后第3天、5天处死动物,分离主要组织器官,HE染色观察病理改变。
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