大鼠嗅球切除模型

雄性大鼠，体重300-350 g，SD大鼠应用最广泛。

1. 药品与试剂

水合氯醛（或其它麻醉药物如戊巴比妥钠）；无菌生理盐水（或PBS或双蒸水）；H2O2溶液；吸收性明胶海绵；青霉素钠粉；云南白药；乙醇。

2. 实验仪器 脑立体定位仪；电动磨钻；自制探针；真空水泵；手术器械。

3. 实验方法

在手术前1周内，每日对大鼠进行2次抚摸以减少应激。术前给予水合氯醛（400 mg/kg，ip）麻醉大鼠，在两耳联线中点处将皮肤切开，暴露颅骨，在距前囟前8 mm，与正中缝两侧旁开2 mm的交点处，分别用电动磨钻将颅骨钻两个直径2 mm 的小孔，用自制探针搅动破坏嗅球后，再用真空泵将破坏的嗅球组织吸出。将吸收性明胶海绵填入小孔止血。假手术大鼠采用相同的手术方法，但在手术定位点上钻孔后不损伤嗅球。术后采用75 %乙醇-云南白药混合剂涂抹伤口，并肌注青霉素钠（40000 U/ml），连续注射4 d，以防术后感染。嗅球切除术后大鼠需恢复14 d，恢复阶段每日抚摸大鼠以减少应激性，14天后方可进行药物处理及行为学测试。行为学测试主要包括开场实验、蔗糖饮水实验、被动回避实验等。

图1 大鼠嗅球解剖位置示意图

4. 注意事项

（1）大鼠体重会影响嗅球解剖位置的定位坐标；

（2）术前、术后的抚触可有效减少大鼠的应激反应；

（3）手术过程中应尽量减少出血；

（4）行为学测试结束后，每只动物需检查嗅球和前额叶皮层位置，对于嗅球切除体积低于70%或损伤前额叶皮层的动物，数据应剔除。

图2 大鼠嗅球切除前后对比（A嗅球切除前；B嗅球切除后）

5. 模型分析指标

5.1 开场实验

利用大鼠自主活动实验实时检测系统进行实验。自主活动测试箱为黑色不锈钢材料制成的圆柱形桶，测试箱顶部敞开。采用图像采集系统对测试大鼠的行为进行实时监测，再通过计算机系统对。大鼠的自主活动信息进行数据处理。检测时将大鼠面壁放入测试箱内，动物放入测试箱内，立即开始检测。每次实验时应从同一位置同一方向放入动物。实验检测时间宜为5 min-10 min。

5.2 强迫游泳实验　

利用计算机图像实时检测分析处理系统自动分析记录动物运动状态。将小鼠放入小鼠强迫游泳仪器中( 高20 cm，直径18 cm，水深12 cm)，保持水温(23~25 °C)。动物适应2 min后，系统自动记录动物后4 min 内的累积不动时间( 不动状态即小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面，小鼠呈现出停止挣扎或呈漂浮状态)。

a) 总路程（total distance）：动物在实验记录时间内产生的物理位移累积。

b) 速度（speed）：动物在单位时间产生的物理位移。 5 min内正常动物总路程多为1000 cm -2500 cm，速度为3 cm/s -8 cm/s。动物出现抑郁行为时，速度减少。

c) 运动总时间（total move time）：动物在实验记录时间内的产生物理位移时所需的时间累积。正常动物运动时间多大于检测时间的30%；抑郁行为判断标准：与对照组相比有显著性减低（P <0.05）。

d) 站立次数（number of standing）：动物在实验记录时间内的站立总次数。10 min检测时间，正常组大鼠站立次数20次-50次。10 min检测时间，正常组小鼠站立次数60次-130次，抑郁行为判断标准：与对照组相比有显著性减低（P <0.05）。

图3 大鼠嗅球切除对动物开场实验的影响（sham 空白组；OBX 嗅球切除组；OXB+Flu 绣球切除+氟西汀）

2.嗅球切除对动物强迫游泳实验的影响

评价指标应采用动物不动、攀爬、游泳三类动作的时间及次数进行判定。

a)　不动（immobility）：动物在水中停止挣扎，呈漂浮状态，仅有轻微的肢体运动以保持头部浮在水面。不动时间越长表明抑郁程度越重。正常小鼠不动时间在检测时间的40%-80%内；正常大鼠不动时间在检测时间的30%-70%内；抑郁行为判断标准：不动时间与对照组相比显著性增加（P <0.05）。

b)　游泳（swimming）：动物进行流畅、协调的运动，动物四肢始终在水面以下。游泳时间和游泳距离越少，表明抑郁程度越重。

c)　攀爬（climbing）：动物四肢强有力伸出水面，并沿测试箱壁做剧烈的上下动作。5 min检测期内, SD大鼠攀爬时间60 s -130 s。攀爬时间越少，表明动物抑郁程度越重。

图4 大鼠嗅球切除对动物强迫游泳实验的影响（sham 空白组；OBX 嗅球切除组；OXB+Flu 绣球切除+氟西汀）