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ICR小鼠
(1)病毒准备:使用的小鼠适应株为MP10,为FY0805a在小鼠体内连续传代10次后的小鼠适应株,GenBank存储号为HQ712020。
(2)实验动物:使用SPF级别的7日龄ICR乳鼠,母鼠自然哺乳,在动物生物安全二级实验室内独立饲养。ICR小鼠毛色白化。适应性强,体格健壮,繁殖力强,生长速度快,实验重复性较好。是国际通用的封闭群小鼠。外周血项和骨髓细胞,具有较好的稳定性,是良好的血液学实验用动物。是进行手足口病原研究的理想动物。
(3)病毒感染:根据预实验确定感染剂量,7日龄乳鼠,经口灌胃感染107TCID50的EV71MP10病毒,攻毒体积为100微升/只,空白对照组注射等量RD细胞上清。
1.动物症状观察
动物自感染EV71 MP10后第5天开始出现症状,表现为体重增长变缓、弓背竖毛、后肢行动迟缓至瘫痪等症状(图1)。感染后第7天时,有动物出现死亡,观察12天后存活率为40%。
图1. EV71 MP10灌胃感染小鼠的体重变化、临床评分、生存率变化
2. 组织内病毒复制情况
检测血液中病毒载量变化发现:感染后第3天和第5天的病毒载量基本持平,均为106copies/μl。感染小鼠后肢肌肉中的病毒载量3天时为108copies/mg,到5天时上升到109copies/mg,表明了病毒感染引发病毒血症后,病毒经血液向组织扩散,并在肌肉组织内复制。在其他组织中,小鼠心脏和肝脏中病毒载量较高,病毒载量均超过104copies/mg(图2)。
图2. EV71 MP10灌胃感染7日龄ICR乳鼠后,血液、后肢肌肉组织和其他组织中病毒载量情况。
注:D,感染后第3天和第5天血液中EV71 MP10病毒载量情况;E,感染后第3天和第5天后肢肌肉组织中EV71 MP10病毒载量情况;F,感染后第5天其他组织EV71 MP10病毒载量情况。(n=5-6)
3. 病理改变
根据临床症状发现EV71 MP10感染后小鼠后肢出现明显瘫痪症状,且已检测到多种组织中有大量的病毒核酸,证明病毒已进入各组织并进行扩增复制,进一步取感染后第5天时各组织进行病理检测发现。与临床症状类似,后肢骨骼肌病理损伤最为严重,表现为骨骼肌细胞变性坏死,炎细胞大量浸润(图3)。在脾脏中出现脾脏髓外造血,部分动物出现白髓萎缩现象,并伴有巨噬细胞吞噬凋亡的淋巴细胞形成的星空现象。部分感染动物的胸腺组织出现胸腺皮质淋巴细胞凋亡及坏死,胸腺皮质变薄,淋巴细胞减少等病理损伤。脑组织也发生病变,局部神经元周围和网状神经毡可见空泡,少数神经元固缩(图3)。
图3. EV71 MP10灌胃感染7日龄ICR乳鼠组织病理变化情况
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