辐射诱导小鼠肠损伤模型

C57BL/6J小鼠。

1. 实验动物 SPF级C57BL/6 雄性小鼠由中国医学科学院动物研究所提供。
2.照射条件: 137Cs γ射线辐射源购自加拿大原子能有限公司(剂量率为0.76 Gy∙min−1), 小鼠接受全身一次性照射, 剂量为7.2Gy。
3. 观察30天生存率每日观察小鼠一般状况，称重；
4. 实验取材 照射24 h 后颈椎脱臼处死小鼠, 取小肠组织, 依次用预冷PBS、10%中性福尔马林冲洗内容物。然后将小肠切成小段, 用医用透气胶带成捆包扎, 固定, 24 h 后脱水并制作石蜡块。
5.HE 染色和免疫组化实验小肠组织HE 染色采用传统实验方法。镜下通过形态学变化计数小肠隐窝内凋亡细胞数量。小肠组织内几种蛋白表达检测参考试剂说明书采用免疫组化两步法检测。主要步骤: 脱蜡, 0.1 mol∙L−1柠檬酸盐95 ℃修复30 min, 10%过氧化氢室温孵育10 min, 第一抗体4 ℃孵育过夜,第二抗体37 ℃孵育30 min, DAB 显色, 苏木素复染, 脱水封片。然后盲法镜下计数每只小鼠50 个完整小肠隐窝阳性细胞数。完整隐窝标准: 切面在隐窝中心,可见清晰、完整的隐窝腔, 隐窝底部有4～6 个分泌细胞, 分泌细胞至隐窝顶部每侧至少有10 个隐窝上皮细胞。
6.数据处理生存率用百分数表示, 两组间比较采用卡方检验。其他数据以x ±s 表示, 组间比较采用t 检验。

1. 30天生存率照射后7 天, 对照组、照射组小鼠的存活率分别为100.0%、60.0%(P<0.05)。对照组的30 天生存率为100%, 照射组第11 天全部死亡。照射组死亡小鼠的平均生存天数分别为7.5天。

2.全身照射小鼠小肠隐窝细胞凋亡的影响小肠隐窝HE 染色和caspase-3 染色的结果图2。在小肠隐窝HE 染色结果中, 照射组的每个隐窝平均凋亡细胞数量（1.98 ±0.25）比对照组（0.14 ±0.02 ）升高(P < 0.001)。在小肠隐窝caspase-3免疫组化染色结果中, 对照组的阳性细胞较少（0.01 ±0.01），照射组的每个隐窝平均凋亡细胞数量（0.51 ±0.07）比对照组明显升高(P<0.001)。

3.全身照射对小鼠小肠隐窝细胞p53表达的影响小肠隐窝p53 染色结果显示, 照射组每个隐窝p53阳性细胞数量（9.74 ±1.27）比对照组（1.36 ±0.15）有显著升高(P<0.001)。

图 全身照射小鼠小肠隐窝细胞凋亡及caspase3、p-p38、p53、Ki67免疫组化染色