氧嗪酸钾致小鼠急性高尿酸血症动物模型

SPF级ICＲ小鼠160 只，雌雄各半，由中国医学科学院医学生物学研究所小动物实验部提供，屏障系统内饲养。饲养环境温度 20℃ ～ 25℃ ，湿度

40% ～ 70% ，自由饮水和采食。

氧嗪酸钾，Sigma 公司产品，纯度≥97%。溶于羧甲基纤维素钠，制备成100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg / kg和600mg / kg剂量。

SPF级ICＲ小鼠160 只，雌雄各半，18~22g,饲养于屏障环境。

对照组腹腔注射1%CMC-Na，实验组给药方案分别如下:600mg / kg剂量氧嗪酸钾组、47.2mg/kg剂量别嘌醇组、600mg/kg氧嗪酸钾 + 47.2mg/kg别嘌醇组600mg/kg氧嗪酸钾+ 6.3mg/kg别嘌醇组。

给药后1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血0.4ml于1.5ml EP管中，置于4℃冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min离心15min，取血清，磷钨酸法测定尿酸值。

8小时后处死小鼠，取肝脏，提取RNA，逆转录为cDNA,设计引物F:5 ＇-TGATGCAAGCTGGTGGTG-3 ＇;R:5 ＇-GCCACTGAGGTCAGTTCAAGGA -3＇实时荧光定量法检测: 首先将小鼠肝脏 c DNA 以 10 为稀释因子，做 5 个梯度稀释，然后分别做 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因的标准曲线，再根据标准曲线的扩增效率对基因的表达效率进行检测。具体操作方法如下: 分别加 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因上、下游引物各 1μL( 10p) ，再分别加 SYBＲ Premix Ex Taq II ( Tli ＲNase H Plus) 12．5μL 及灭菌去离子水 9． 5μL、c DNA 1μL，总体积 25μL，实时荧光定量 PCＲ 设无模板对照反应条件为: 94℃ 预变性 30s，94℃变性 5s、59℃ 退火 30s、40 个循环，其中 59℃ 到 94℃ 每 5s 采集一次荧光。反应完成后根据荧光信号的数据，使用 CFXManager软件计算出 XDH/XO mＲNA 表达的差异。

给药后 1h，氧嗪酸钾各剂量组的血清尿酸值都开始升高，其中 200mg/kg、300mg/kg 以及 600mg/kg 氧嗪酸钾剂量组与对照组比较显著增高。造模后 2h 只有 600mg/kg 氧嗪酸钾剂量组血清尿酸值继续升高到( 432 ± 34) μmol/L，其它各组血清尿酸值均已下降，600mg/kg 氧嗪酸钾剂量组血清尿酸值在药后 4h也开始下降到和正常对照组一般的水平（表1）。

小鼠鼠腹腔注射 600mg/kg 剂量的氧嗪酸钾组，肝脏组织 XDH/XOmＲNA 表达较对照组上调; 同时注射 600mg / kg 剂量氧嗪酸钾、47． 2mg / kg 和 3mg / kg 剂量的别嘌醇组，肝脏组织 XDH / XOmＲ-NA 表达较模型组 600mg / kg 剂量的氧嗪酸钾组下调，差异不明显，注射 47． 2mg/kg 和 Blank 组( 未做任何给药处理的组) 与1% CMC-Na 组 XDH / XOmＲNA 相当（表2）。

表2 黄嘌呤氧化酶表达