6OHDA小鼠PD模型

6-OHDA结构类似儿茶酚胺，自20世纪60年代末以来，它一直被用于啮齿类动物进行PD研究。由于6-OHDA分子具有亲水性，它不能穿过血脑屏障（BBB），因此需要通过立体定位注射直接注入到目标大脑结构中，注射位点通常是黑质SNc、内侧前脑束MFB或纹状体STR，而在某些情况下，也被注入脑室区域。6-OHDA通过一个两步机制来实现其神经毒性，首先通过多巴胺和去甲肾上腺素膜转运蛋白聚集到儿茶酚胺能神经元，然后会对线粒体复合物I产生抑制作用。

在SNc或MFB脑区中注射6-OHDA，超过90%的多巴胺能神经元会在几天内迅速发生退化变性。通常研究者在单侧诱导病变，以减少动物死亡，并使动物产生有效的、容易检测的单侧运动损伤，如同侧性运动不能和旋转行为等。通过在背侧纹状体脑区注射6-OHDA可以观察到PD早期模型的局部病变。此外，双侧6-OHDA病变为非运动性症状提供了证据，它能引起焦虑、抑郁和嗅觉缺陷等病症表型。尽管6-OHDA模型动物中没有LB产生，模型发展也没有渐进性，但是它在细胞和分子水平上为我们研究PD提供了大量的信息。例如，在6-OHDA诱导损伤大鼠的基底神经节（BG）中，谷氨酸能突触传递有显著的增加，而皮质纹状体的突触可塑性则由于大量或部分的纹状体神经变性而改变。6-OHDA模型也被成功地用于研究经典帕金森病的治疗作用机制，如左旋多巴、脑深部电刺激以及如针对代谢性谷氨酸受体的新方法。这些方法可能通过正常化纹状体和BG突触传递，改善运动行为。此外，在MFB注射6-OHDA导致多巴胺能神经元的消耗，并伴有去甲肾上腺素和血清素的消耗，会显著诱发焦虑、快感缺乏和抑郁行为。

1、模型制作

通过立体定位注射将6-OHDA（6µg/µl）打到小鼠纹状体脑区，参考坐标AP: +0.3; L: +2.3, DV:-2.9。

2、6-OHDA小鼠脑部病理表型

酪氨酸羟化酶免疫组化：

为了观察立体定位注射的6-OHDA对小鼠黑质多巴胺系统的影响，用免疫组化检测假手术组和6-OHDA小鼠酪氨酸羟化酶（TH，多巴胺能神经元的标志物）的表达，结果如图1。6-OHDA注射侧纹状体内TH几乎不表达，黑质内多巴胺能神经元的数量明显减少。

图1.酪氨酸羟化酶免疫组化

免疫组化检测酪氨酸羟化酶在脑组织中黑质和纹状体区的表达情况。箭头为针迹，标尺为1.5mm。

3、6-OHDA小鼠行为学表现

空场实验

分析小鼠手术后的基本运动情况，进行空场实验。检测指标包括运动路程，速度及旋转次数等。

图2小鼠空场实验行为学结果

A-D假手术组和模型组在总运动路程、中央区和边缘区运动路程、速度等指标无显著性差异；E模型组转圈次数与假手术组比较，出现显著性差异，** P<0.01。

圆筒实验

为了分析小鼠上下肢活动情况进行了圆筒实验。圆桶放在工作台上，将一面镜子竖直放在圆桶后面的墙上，小鼠背对实验人员时，也可以通过镜子看到并量化小鼠的活动。将小鼠放入圆桶，录像3 分钟。并分析小鼠站立次数、前肢活动、理毛时间、转圈次数。

图3小鼠圆筒实验行为学结果

A-D模型组站立次数、双侧前肢接触桶次数减少，右前肢接触桶臂次数、向右转圈次数增加，与假手术组比较，具有显著性差异，** P<0.01；E模型组理毛次数减少，与假手术组比较有下降趋势，无显著性差异。

平衡木穿越实验

为了进一步评价小鼠的运动功能，进行平衡木穿越实验。将3只空鼠盒倒扣等距放在实验台上。连接4个不同宽度的平衡木（从最宽至最窄部分），将连接的平衡木放在空鼠盒上。将实验小鼠的家笼（内放垫料）放置在平衡木最窄端。在平衡木上放置网格，小鼠在网格上行走，穿越平衡木。记录并分析小鼠的爪子落进网格内或网格外面的错误次数，计算错误百分率。

图4小鼠平衡木穿越实验行为学结果

A模型组错误步数百分率与假手术组比较，无显著性差异。B模型组穿越平衡木总时间延长，与假手术组比较，具有显著性差异，** P<0.01。