小鼠肺癌LEWIS绿色荧光标记细胞C57BL小鼠肿瘤模型

小鼠肺癌Lewis细胞系广泛应用于转移瘤的研究，并且在肿瘤化疗药物研究中发挥着一定的作用。Lewis肺癌细胞系来源于C75BL小鼠初级Lewis肺癌移植瘤，该细胞系具有1,3-bis-(2-氯乙烯)-1-亚硝基脲抗性，但却对甲氨蝶呤敏感。报道称，该细胞系在小鼠中具有高效致瘤性，但转移率较低。该细胞在培养瓶中呈多层生长状态，检测发现该细胞系为鼠痘病毒阴性。

1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近亲培育时，用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中将毛色呈黑色的进行固定，培育成C57BL。1937年Little将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL/6，将第十组亚系定名为C57BL/10，继而分别维持至今。1947年从Little引入到美国JacksonLab.，形成C57BL/6J;1951年从JacksonLab.引到NIH，形成C57BL/6N亚系。六十年代到日本实验动物中央研究所，1986年自日本实验动物中央研究所引入到中科院上海实验动物中心。2001年从美国再次引种。

动物外部特征为：黑色；

遗传基本组成：a/a,C/C:H-2b,Mup-1b,Ig-1b,T1ab(a/B/C/D/H-2b)

遗传概貌：符合国标GB14923－94标准

携带微生物情况：符合国标GB14922－94SPF级质量标准

繁殖性能：产仔率：89～95％ 平均窝产仔数：6.98～7.48只

胎间隔：28～36天 离乳存活率：87～93％

模型制作采用C57/BL小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。

4.1细胞培养：Lewis肺癌细胞为本实验室冻存

4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP

图1绿色荧光表达载体的构建

4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Lewis细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。

图2绿色荧光标记的Lewis细胞系（200×）

稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

5.1影像分析

图3 皮下接种Lewis-eGFP肿瘤生长影像分析

应用小动物活体荧光成像系统可监测到绿色荧光蛋白在裸小鼠皮下的稳定表达，从第1周至第4周，随着肿瘤移植时间的增加，表达绿色荧光蛋白的面积逐渐增大（图3）。