人鼠黑色素瘤B16荧光素酶标记肿瘤模型

B16黑色素瘤细胞(简称B16细胞)是来源于C57BL黑小鼠皮肤的自发性肿瘤。

裸鼠, 先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群（Linkage group）内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nu/+）各方面表现都正常。

1. 细胞：B16小鼠黑色素瘤细胞系(购自医科院肿瘤所)；表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。

2. B16-Luc荧光细胞获得：采用脂质体2000转染B16细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB／CA- nu裸鼠（5周龄，体重15-18 g）进行尾静脉接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14和21天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

1.尾静脉接种BALB／C裸鼠发生肺转移

本模型将luc基因转染到B16小鼠黑色素瘤细胞中得到了高表达luciferase细胞株。将luc标记的B16小鼠黑色素瘤细胞尾静脉接种至BALB／CA- nu裸鼠，用活体荧光成像系统连续观察，发现21d能够发生肺转移。利用B16-luc化学发光细胞和活体动物体内光学成像系统可以实现活体、动态和即时的转移肿瘤分析。

图1 小鼠黑色素瘤B16尾静脉接种21天肺转移显像

2.模型应用-C57小鼠也可成瘤

高昆等利用B16实验性肺转移模型研究IL33对肿瘤生长和迁移的抑制作用见图2。C57小鼠尾静脉接种B16-LUC细胞18d 天可以看到肺转移，23d后肺部肿瘤面积变大，更为显著。

图2 C57小鼠尾静脉接种B16-LUC细胞18d 、23d后进行活体荧光观察